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轉(zhuǎn)氫酶-1檢測試劑盒

描述:測定意義
TH位于線粒體的內(nèi)膜上,又稱為呼吸電子傳遞鏈復(fù)合體六,催化NADH+NADP+和 NAD++NADPH相互轉(zhuǎn)化。催化正向反應(yīng)稱為TH-1。線粒體NADH含量增加時(shí)會(huì)導(dǎo)致線粒體膜的H+電化學(xué)梯度升高,因而促進(jìn)了電子傳遞鏈上ROS的產(chǎn)生。TH-1促進(jìn)NADH轉(zhuǎn)換為NADPH,從而提高線粒體的抗氧化能力。
轉(zhuǎn)氫酶-1檢測試劑盒

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2019-11-07
  • 訪問量:509
產(chǎn)品詳情/ PRODUCT DETAIL

標(biāo)題:轉(zhuǎn)氫酶-1檢測試劑盒

產(chǎn)品概述

轉(zhuǎn)氫酶-1檢測試劑盒

測定原理

NADHNADPH均在340nm有特征吸收,因此TH催化的轉(zhuǎn)氫反應(yīng)不能導(dǎo)致340nm吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸磷酸(APADP+)替代NADP+,TH-1催化 APADP+還原生成的APADPH375nm有特征光吸收,因此通過測定375nm光吸收增加速率,來計(jì)算TH-1活性。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一:液體50mL×1瓶,-20保存;

試劑二:液體25mL×1瓶,-20保存;

試劑三:液體25mL×2瓶,4保存;

試劑四:粉劑×2-20保存;

試劑五:粉劑×2支,-20保存;

工作液的配制:臨用前取試劑三、試劑四和試劑五各一支,將試劑四、五轉(zhuǎn)移到試劑三中混合溶解。這樣可以根據(jù)需要分兩批配制工作液,防止工作液失效。

TH-1的提取

  • 稱取約0.1g組織或收集500萬細(xì)胞,加入1.0 mL試劑一,用冰浴勻漿。
  • 4 600 g離心5min。
  • 將上清液移至另一離心管中,4 11000 g離心10min。
  • 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的TH-1(此步可選做,可以判斷線粒體提取效果)。
  • 在沉淀中加入500uL試劑二,超聲波破碎(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),用于TH-1活性和蛋白含量測定,蛋白質(zhì)含量測定需要另外購買相應(yīng)的試劑盒。

測定步驟:

  1. 調(diào)零

用蒸餾水于375nm處調(diào)零。

  1. 樣本測定

1)取1mL工作液加入1mL玻璃比色皿,在37℃(哺乳動(dòng)物)25℃(其它物種)孵育5min。

2)取出比色皿,加入100μL試樣本,混勻;立即記錄375nm處初始吸光值A1,37℃(哺乳動(dòng)物)25℃(其它物種)中準(zhǔn)確反應(yīng)10min,記錄375nm10min后的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A2-A1。

轉(zhuǎn)氫酶-1檢測試劑盒

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