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轉(zhuǎn)氫酶-2檢測(cè)試劑盒

描述:測(cè)定意義
TH位于線粒體的內(nèi)膜上,又稱為線粒體復(fù)合體六,催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互轉(zhuǎn)化,調(diào)節(jié)線粒體NAD(H)和NADP(H)平衡。把逆向反應(yīng)稱為TH-2,催化NADPH和NAD+生成NADP+和NADH。
轉(zhuǎn)氫酶-2檢測(cè)試劑盒

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2019-11-07
  • 訪問(wèn)量:433
產(chǎn)品詳情/ PRODUCT DETAIL

標(biāo)題:轉(zhuǎn)氫酶-2檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述

轉(zhuǎn)氫酶-2檢測(cè)試劑盒

測(cè)定原理

NADHNADPH均在340nm有特征吸收,因此TH催化的轉(zhuǎn)氫反應(yīng)不能導(dǎo)致340nm吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸(APAD+)替代NAD+,TH-2催化APAD+還原生成APADHAPADH375nm有特征光吸收,測(cè)定375nm光吸收的增加速率,來(lái)計(jì)算TH-2活性。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一:液體50mL×1瓶,-20保存;

試劑二:液體25mL×1瓶,-20保存;

試劑三:液體25mL×2瓶,4保存;

試劑四:粉劑×2-20保存;

試劑五:粉劑×2支,-20保存;

工作液的配制:臨用前取試劑三、試劑四和試劑五各一支,將試劑四、五轉(zhuǎn)移到1瓶試劑三中混合溶解。這樣可以分兩批配制工作液,防止工作液失效。

轉(zhuǎn)氫酶-2的提取

  • 稱取約0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞,加入1.0 mL試劑一,冰浴勻漿。
  • 4 600 g離心5min。
  • 將上清液移至另一離心管中,4 11000 g離心10min。
  • 上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的TH-2(此步可選做,可以判斷線粒體提取效果)。
  • 在沉淀中加入500uL試劑二,超聲波破碎(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),用于TH-2活性測(cè)定,并且用于蛋白含量測(cè)定,蛋白質(zhì)含量測(cè)定需要另外購(gòu)買相應(yīng)試劑盒。

測(cè)定步驟:

  1. 調(diào)零

用蒸餾水于375nm處調(diào)零。

  1. 樣本測(cè)定

1)取1mL工作液加入1mL玻璃比色皿,在37℃(哺乳動(dòng)物)25℃(其它物種)孵育5min。

2)取出比色皿,加入100μL樣本,混勻;立即記錄375nm處初始吸光值A1,37℃(哺乳動(dòng)物)25℃(其它物種)中準(zhǔn)確反應(yīng)10min,記錄375nm10min后的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A2-A1。

轉(zhuǎn)氫酶-2檢測(cè)試劑盒

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