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P產(chǎn)品分類RODUCT CATEGORY
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描述:測(cè)定意義TH位于線粒體的內(nèi)膜上,又稱為線粒體復(fù)合體六,催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互轉(zhuǎn)化,調(diào)節(jié)線粒體NAD(H)和NADP(H)平衡。把逆向反應(yīng)稱為TH-2,催化NADPH和NAD+生成NADP+和NADH。轉(zhuǎn)氫酶-2檢測(cè)試劑盒
標(biāo)題:轉(zhuǎn)氫酶-2檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品概述
轉(zhuǎn)氫酶-2檢測(cè)試劑盒
測(cè)定原理
NADH和NADPH均在340nm有特征吸收,因此TH催化的轉(zhuǎn)氫反應(yīng)不能導(dǎo)致340nm吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸(APAD+)替代NAD+,TH-2催化APAD+還原生成APADH,APADH在375nm有特征光吸收,測(cè)定375nm光吸收的增加速率,來(lái)計(jì)算TH-2活性。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一:液體50mL×1瓶,-20℃保存;
試劑二:液體25mL×1瓶,-20℃保存;
試劑三:液體25mL×2瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2支,-20℃保存;
試劑五:粉劑×2支,-20℃保存;
工作液的配制:臨用前取試劑三、試劑四和試劑五各一支,將試劑四、五轉(zhuǎn)移到1瓶試劑三中混合溶解。這樣可以分兩批配制工作液,防止工作液失效。
轉(zhuǎn)氫酶-2的提取
測(cè)定步驟:
用蒸餾水于375nm處調(diào)零。
(1)取1mL工作液加入1mL玻璃比色皿,在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)孵育5min。
(2)取出比色皿,加入100μL樣本,混勻;立即記錄375nm處初始吸光值A1,37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)中準(zhǔn)確反應(yīng)10min,記錄375nm處10min后的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A2-A1。
轉(zhuǎn)氫酶-2檢測(cè)試劑盒
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