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線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅴ活性檢測試劑盒

描述:測定意義
線粒體復(fù)合體Ⅴ又稱F1F0-ATP合酶,廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,由F1和F0兩個(gè)亞單位組成。該酶利用呼吸鏈產(chǎn)生的質(zhì)子電化學(xué)梯度催化ATP合成,也可逆過程水解ATP。此外,復(fù)合體Ⅴ還存在于葉綠體、異養(yǎng)菌和光合細(xì)菌中。復(fù)合體Ⅴ是線粒體氧化磷酸化和葉綠體光合磷酸化合成ATP的關(guān)鍵酶。
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅴ活性檢測試劑盒

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2019-11-07
  • 訪問量:822
產(chǎn)品詳情/ PRODUCT DETAIL

標(biāo)題:線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅴ活性檢測試劑盒

產(chǎn)品概述

線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅴ活性檢測試劑盒

測定原理

復(fù)合體水解ATP產(chǎn)生ADPPi,通過測定Pi增加速率來測定復(fù)合體活性。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一:25mL×1瓶,-20保存;

試劑二:25mL×1瓶,-20保存;

試劑三1 mL×1瓶,-20保存;

試劑四:粉劑×1-20保存;臨用前每支加入1.3mL雙蒸水,充分溶解備用,用不完的試劑仍-20保存;

試劑五:6mL×1瓶,4保存;

試劑六:粉劑×1瓶,4保存;臨用前加入3mL雙蒸水,充分混勻;

試劑七:粉劑×1, 4保存;臨用前加入10mL雙蒸水,充分混勻;

試劑八:粉劑×1, 4保存;臨用前加入10mL雙蒸水,充分混勻;

試劑九:液體10mL×1 瓶,室溫保存。

定磷試劑的配制:H2O: 試劑七:試劑八:試劑九=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷試劑應(yīng)為淺黃色。若無色則試劑失效,若是藍(lán)色則為磷污染(請根據(jù)需要,用多少配多少)。

注意:配試劑用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器,或者一次性塑料器皿,以避免磷污染。

復(fù)合體的提取

  • 稱取約0.1g組織或收集500萬細(xì)胞,加入1.0 mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
  • 4 600 g離心5min。
  • 將上清液移至另一離心管中,4 11000 g離心10min。
  • 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的復(fù)合體(此步可選做,可以判斷線粒體提取效果)。
  • 在沉淀中加入800uL試劑二和8uL 試劑三,超聲波破碎(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),用于復(fù)合體酶活性測定,并且用于蛋白含量測定。

測定步驟

1、酶促反應(yīng)

試劑名稱(μL

對照管

測定管

試劑四

50

50

試劑五

200

200

 樣品

 

250

混勻, 37(哺乳動物)或25(其它物種)準(zhǔn)確水浴30min

試劑六

100

100

樣品

250

 

混勻,4000g,室溫離心10min,取上清液

2、定磷

上清液

250

250

定磷試劑

1250

1250

混勻,室溫靜置10min左右,在 660nm處用對照管調(diào)零,讀取測定管吸光值

線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅴ活性檢測試劑盒

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