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描述:測(cè)定意義線粒體復(fù)合體Ⅱ又稱(chēng)琥珀酸-輔酶Q還原酶,廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,催化琥珀酸氧化生成延胡索酸,同時(shí)輔基FAD還原為FADH2,后者進(jìn)一步還原氧化型輔酶Q生成還原型輔酶Q,是呼吸電子傳遞鏈的支路。線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性檢測(cè)試劑盒
標(biāo)題:線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品概述
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性檢測(cè)試劑盒
測(cè)定原理
復(fù)合體Ⅱ的催化產(chǎn)物還原型輔酶Q可進(jìn)一步還原2,6-二氯吲哚酚,2,6-二氯吲哚酚在605nm有特征吸收峰,通過(guò)檢測(cè)2,6-二氯吲哚酚的減少速率來(lái)計(jì)算該酶活性。
需自備的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制
試劑一:25mL×1瓶,-20℃保存;
試劑二:5mL×1瓶,-20℃保存;
試劑三:0.5 mL×1支,-20℃保存;
試劑四:液體25mL×1瓶,4℃保存;
試劑五:粉劑×1支,-20℃保存;
試劑六:粉劑×1支,-20℃保存;
試劑七:液體2.5mL×1瓶,4℃保存;
工作液的配制:臨用前依次把試劑五和試劑六轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解。
復(fù)合體Ⅱ的提?。?/span>
測(cè)定步驟:
用蒸餾水于605nm處調(diào)零。
(1)取40μL酶液和800μL工作液加入1mL玻璃比色皿,在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)孵育5min。
(2)取出比色皿,加入100μL試劑七,混勻;立即記錄605nm處初始吸光值A1,37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)中準(zhǔn)確反應(yīng)2min,記錄605nm處2min后的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性檢測(cè)試劑盒
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