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線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性檢測(cè)試劑盒

描述:測(cè)定意義
線粒體復(fù)合體Ⅱ又稱(chēng)琥珀酸-輔酶Q還原酶,廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,催化琥珀酸氧化生成延胡索酸,同時(shí)輔基FAD還原為FADH2,后者進(jìn)一步還原氧化型輔酶Q生成還原型輔酶Q,是呼吸電子傳遞鏈的支路。
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性檢測(cè)試劑盒

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2019-11-07
  • 訪問(wèn)量:495
產(chǎn)品詳情/ PRODUCT DETAIL

標(biāo)題:線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述

線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性檢測(cè)試劑盒

測(cè)定原理

復(fù)合體Ⅱ的催化產(chǎn)物還原型輔酶Q可進(jìn)一步還原2,6-二氯吲哚酚,2,6-二氯吲哚酚在605nm有特征吸收峰,通過(guò)檢測(cè)2,6-二氯吲哚酚的減少速率來(lái)計(jì)算該酶活性。

需自備的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制

試劑一:25mL×1瓶,-20保存;

試劑二:5mL×1瓶,-20保存;

試劑三0.5 mL×1支,-20保存;

試劑四:液體25mL×1瓶,4保存;

試劑五:粉劑×1支,-20保存;

試劑六:粉劑×1支,-20保存;

試劑七:液體2.5mL×1瓶,4保存;

工作液的配制:臨用前依次把試劑五和試劑六轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解。

復(fù)合體Ⅱ的提?。?/span>

  1. 準(zhǔn)確稱(chēng)取0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
  2. 4 600 g離心5min
  3. 將上清液移至另一離心管中,4 11000 g離心10min
  4. 上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的復(fù)合體(此步可選做)。
  5. 在沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),用于復(fù)合體Ⅱ酶活性測(cè)定。

測(cè)定步驟:

  1. 調(diào)零

用蒸餾水于605nm處調(diào)零。

  1. 樣本測(cè)定

1)取40μL酶液和800μL工作液加入1mL玻璃比色皿,在37℃(哺乳動(dòng)物)25℃(其它物種)孵育5min

2)取出比色皿,加入100μL試劑七,混勻;立即記錄605nm處初始吸光值A1,37℃(哺乳動(dòng)物)25℃(其它物種)中準(zhǔn)確反應(yīng)2min,記錄605nm2min后的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A1-A2

線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性檢測(cè)試劑盒

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