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線粒體呼吸鏈復合體Ⅲ活性檢測試劑盒

描述:測定意義
線粒體復合體Ⅲ(EC 1.10.2.2)又稱CoQ-細胞色素C還原酶,廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分,負責把還原型CoQ的氫傳遞給細胞色素C,生成還原型細胞色素C。
線粒體呼吸鏈復合體Ⅲ活性檢測試劑盒

  • 產品型號:
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2019-11-07
  • 訪問量:413
產品詳情/ PRODUCT DETAIL

標題:線粒體呼吸鏈復合體Ⅲ活性檢測試劑盒

產品概述

線粒體呼吸鏈復合體Ⅲ活性檢測試劑盒

測定原理

與氧化型細胞色素C不同,還原型細胞色素C550nm有特征光吸收,因此550nm光吸收增加速率能夠反映線粒體復合體Ⅲ酶活性。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一:25mL×1瓶,-20保存;

試劑二:5mL×1瓶,-20保存;

試劑三0.5 mL×1支,-20保存;

試劑四:液體20mL×1瓶,4保存;

試劑五:粉劑×1支,-20保存;

試劑六:液體2.5mL×1瓶,-20保存;

工作液的配制:將試劑五轉移到試劑四中混合溶解。

線粒體復合體Ⅲ提?。?/span>

  1. 準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
  2. 將勻漿600g,4離心5min
  3. 將上清液移至另一離心管中,11000g4離心10min。
  4. 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅲ(此步可選做)。
  5. 在沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復30次),用于復合體Ⅲ酶活性測定。

測定步驟:

  1. 調零 用蒸餾水于550nm處調零。
  2. 樣本測定

1)取40μL樣本和800μL工作液于1mL玻璃比色皿中,在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)孵育5min

2)取出比色皿,加入100μL試劑六,混勻,立即記錄550nm處初始吸光值A1,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)中準確反應2min,記錄550nm2min后的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1。

線粒體呼吸鏈復合體Ⅲ活性檢測試劑盒

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