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丙酮酸脫氫酶(PDH)檢測試劑盒

描述:測定意義
PDH(EC 4.1.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶,催化丙酮酸脫梭生成羥乙基-TPP,把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來。
測定原理
PDH催化丙酮酸脫氫,同時還原2,6-二氯酚靛酚(2,6-DCPIP),從而導(dǎo)致600nm光吸收的減少。
丙酮酸脫氫酶(PDH)檢測試劑盒

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2019-11-07
  • 訪問量:525
產(chǎn)品詳情/ PRODUCT DETAIL

標(biāo)題:丙酮酸脫氫酶(PDH)檢測試劑盒

產(chǎn)品概述

丙酮酸脫氫酶(PDH)檢測試劑盒

需自備的儀器和用品

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一:50mL×1瓶,-20保存;

試劑二:10mL×1瓶,-20保存;

試劑三:1mL×1支,-20保存;

試劑四:液體50mL×1瓶,4保存;

試劑五:粉劑×1支,4保存;

試劑六:粉劑×1支,4保存;

試劑七:粉劑×1支,4保存;

試劑八:粉劑×1支,4保存;

工作液的配制:臨用前把試劑五、試劑六、試劑七和試劑八轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解待用。

 PDH的提取

  1. 準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬細(xì)胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
  2. 4 600 g離心5min。
  3. 將上清液移至另一離心管中,4 11000 g離心10min。
  4. 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的PDH(此步可選做)。
  5. 在沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三超聲波破碎(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),用于PDH活性測定。

測定步驟

  1. 調(diào)零

用蒸餾水于605nm處調(diào)零。

  1. 樣本測定

1)取900μL工作液加入1mL玻璃比色皿,在37℃哺乳動物)25℃(其它物種)中孵育5min。

2)取出比色皿,加入50μL酶液,混勻;立即記錄605nm處初始吸光值A1,37℃哺乳動物)25℃(其它物種)中準(zhǔn)確反應(yīng)1min,記錄605nm1min后的吸光值A2,計算ΔA=A1-A2。

注意事項

1、測定過程中所有試劑和樣本在冰上放置,以免變性和失活。

2、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持3725,取小燒杯一只裝入一定量的3725蒸餾水,將此燒杯放入3725水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

3、兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

丙酮酸脫氫酶(PDH)檢測試劑盒

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