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P產(chǎn)品分類RODUCT CATEGORY
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描述:測定意義PDH(EC 4.1.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶,催化丙酮酸脫梭生成羥乙基-TPP,把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來。測定原理PDH催化丙酮酸脫氫,同時還原2,6-二氯酚靛酚(2,6-DCPIP),從而導(dǎo)致600nm光吸收的減少。丙酮酸脫氫酶(PDH)檢測試劑盒
標(biāo)題:丙酮酸脫氫酶(PDH)檢測試劑盒
產(chǎn)品概述
丙酮酸脫氫酶(PDH)檢測試劑盒
需自備的儀器和用品
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一:50mL×1瓶,-20℃保存;
試劑二:10mL×1瓶,-20℃保存;
試劑三:1mL×1支,-20℃保存;
試劑四:液體50mL×1瓶,4℃保存;
試劑五:粉劑×1支,4℃保存;
試劑六:粉劑×1支,4℃保存;
試劑七:粉劑×1支,4℃保存;
試劑八:粉劑×1支,4℃保存;
工作液的配制:臨用前把試劑五、試劑六、試劑七和試劑八轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解待用。
PDH的提取
測定步驟
用蒸餾水于605nm處調(diào)零。
(1)取900μL工作液加入1mL玻璃比色皿,在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)中孵育5min。
(2)取出比色皿,加入50μL酶液,混勻;立即記錄605nm處初始吸光值A1,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)中準(zhǔn)確反應(yīng)1min,記錄605nm處1min后的吸光值A2,計算ΔA=A1-A2。
注意事項
1、測定過程中所有試劑和樣本在冰上放置,以免變性和失活。
2、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃,取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
3、兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
丙酮酸脫氫酶(PDH)檢測試劑盒
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