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丙酮酸激酶(PK)檢測試劑盒

描述:測定原理
PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸,乳酸脫氫酶進(jìn)一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+,在340nm下測定NADH下降速率,即可反映PK活性。
丙酮酸激酶(PK)檢測試劑盒

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2019-11-07
  • 訪問量:558
產(chǎn)品詳情/ PRODUCT DETAIL

標(biāo)題:丙酮酸激酶(PK)檢測試劑盒

產(chǎn)品概述

丙酮酸激酶(PK)檢測試劑盒

測定意義

PKEC 2.7.1.40廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化糖酵解過程中的后一步反應(yīng),是糖酵解過程中的主要限速酶之一,也是產(chǎn)生ATP的關(guān)鍵酶之一,因此測定PK活性具有重要意義。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液:60mL×1瓶,4保存;

試劑一:液體45mL×1瓶,4保存;

試劑二:粉劑×1支,-20保存;

試劑三:粉劑×1支,-20保存;臨用前加入1.5mL雙蒸水充分溶解備用,用不完的試劑仍-20保存;

試劑四:液體×1支,4保存;臨用前每支加入900μL雙蒸水充分溶解備用,用不完的試劑仍4保存;

PK工作液的配制:臨用前將試劑二轉(zhuǎn)移至試劑一中,充分溶解待用。

樣本的前處理

1、細(xì)菌或細(xì)胞處理:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率200W,工作3s,間歇10s,工作35次),8000g4℃,離心10min,取上清,置冰上待測。

2、組織處理:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿;8000g ,4,離心10min,取上清,置冰上待測。

3、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定步驟

        試劑名稱(μL)

測定管

PK工作液

900

試劑三

30

試劑四

15

混勻,37(哺乳動物)或25(其它物種)水浴5min

樣本

30

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,加樣本的同時(shí)開始計(jì)時(shí),在340nm波長下記錄20秒時(shí)的初始吸光度A1,比色后迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入37(哺乳動物)或25(其它物種)水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)2分鐘;迅速取出比色皿并擦干,340 nm下比色,記錄220秒時(shí)的吸光度A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

注意事項(xiàng)

1、測定過程中樣本和所有試劑在冰上放置,以免變性和失活。

2、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持3725,取小燒杯一只裝入一定量的3725蒸餾水,將此燒杯放入3725水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

3、兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn),一個(gè)人比色,一個(gè)人計(jì)時(shí),以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

丙酮酸激酶(PK)檢測試劑盒

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