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苯胺-4羥化酶(AH)檢測(cè)試劑盒

描述:測(cè)定原理:
AH催化苯胺羥化后產(chǎn)生的4-氨基酚,進(jìn)一步轉(zhuǎn)變?yōu)榉?吲哚復(fù)合物,在630nm處有特征吸收峰;通過(guò)測(cè)定630nm吸光度增加速率,來(lái)計(jì)算AH活性。
苯胺-4羥化酶(AH)檢測(cè)試劑盒

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2019-11-07
  • 訪問(wèn)量:440
產(chǎn)品詳情/ PRODUCT DETAIL

標(biāo)題:苯胺-4羥化酶(AH)檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述

苯胺-4羥化酶(AH)檢測(cè)試劑盒

測(cè)定意義:

細(xì)胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶,在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用,尤其是藥物和毒物的代謝。AHP450酶系中相當(dāng)于CYP2E1亞型,CYP2E1不僅參與了藥物的代謝,而且還能催化多種前致癌物和前毒物的活化過(guò)程。

自備儀器和用品:

酶標(biāo)儀、普通離心機(jī),低溫超速離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、酶標(biāo)板和冰。

試劑組成和配置:

試劑一:粉劑×1瓶,4保存。臨用前加入100 mL蒸餾水,充分溶解。

試劑二:液體×1瓶,4保存。

試劑三:粉劑×1瓶,4保存。臨用前加入10 mL蒸餾水,充分溶解。

試劑四:粉劑×1瓶,4保存。臨用前加入2600 μL蒸餾水,充分溶解。

試劑五:粉劑×1瓶,4保存。臨用前加入10 mL蒸餾水,充分溶解。

試劑六:粉劑×1瓶(腐蝕性試劑),4避光保存。臨用前加入5mL蒸餾水,充分溶解。

試劑七:粉劑×1瓶,4保存。臨用前加入5 mL蒸餾水,充分溶解。

標(biāo)準(zhǔn)液:液體×1瓶,10μmol/L,4避光保存。

粗酶液提?。?/span>

1. 除去細(xì)胞核和線粒體等:稱約0.2 g組織,加入4預(yù)冷的500 μ L試劑一,冰上充分研磨,10 000g 4離心30min,取上清液,轉(zhuǎn)移到超速離心管中。

2. 粗制微粒體:4100 000g,離心60min,棄上清液。

3. 除血紅蛋白等雜質(zhì):向步驟2的沉淀中加500 μ L試劑一,蓋緊后充分震蕩溶解,100 000g離心30min,棄上清液。

4. 終微粒體:向步驟3的沉淀中加試劑二200 μ L,蓋緊后充分震蕩溶解,4保存待測(cè)。

測(cè)定:

1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到630 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三置于37水浴中預(yù)熱30min以上。

3. 試劑五置于冰浴預(yù)冷30min以上。

4. 標(biāo)準(zhǔn)孔:在酶標(biāo)板標(biāo)準(zhǔn)孔中,依次加入100μL 標(biāo)準(zhǔn)液,50μL試劑六,50μL試劑七,混勻后室溫靜置30min,于630 nm測(cè)定光吸收,記為A標(biāo)準(zhǔn)孔。

5. 空白孔:取10.5 mL EP管,加入50μL粗酶液,100μL試劑三,50μL蒸餾水,混勻后37水浴中保溫30min;再加入100μL試劑五,混勻后冰浴5min,11000rpm,4,離心10min;在酶標(biāo)板空白孔中依次加入100μL上清液,50μL試劑六,50μL試劑七,混勻后室溫靜置30min,于630 nm測(cè)定光吸收,記為A空白管。

6. 測(cè)定孔:取10.5 mL EP管,加入50μL粗酶液,100μL試劑三,50μL試劑四,混勻后37水浴中保溫30min;再加入100μL試劑五,混勻后冰浴5min,11000rpm4,離心10min;在酶標(biāo)板空白孔中依次加入100μL上清液,50μL試劑六,50μL試劑七,混勻后室溫靜置30min,于630 nm測(cè)定光吸收,記為A空白管。

苯胺-4羥化酶(AH)檢測(cè)試劑盒

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