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P產(chǎn)品分類RODUCT CATEGORY
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描述:測(cè)定意義:ICDHc(EC 1.1.1.42)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化異檸檬酸脫氫脫羧生成 α-酮戊二酸,同時(shí)還原NADP+生成NADPH。ICDHc是細(xì)胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來(lái)源,在逆境中該酶活性通常會(huì)發(fā)生顯著變化。胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)檢測(cè)試劑盒
標(biāo)題:胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品概述
胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)檢測(cè)試劑盒
測(cè)定原理:
利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應(yīng),在340 nm下測(cè)定NADPH濃度的增加。
所需的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:60mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體50 mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×2支,4℃保存;用時(shí)每支加275μL雙蒸水充分溶解備用;
試劑三:粉劑ⅹ2支,-20℃保存;用時(shí)每支加275μL雙蒸水充分溶解備用;
樣本的前處理:
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每200萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
組織:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
測(cè)定操作表:
試劑名稱(μL) | 測(cè)定管 |
試劑一 | 750 |
試劑二 | 10 |
試劑三 | 10 |
樣本 | 30 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,加樣本的同時(shí)開始計(jì)時(shí),在340 nm波長(zhǎng)下記錄20秒時(shí)的初始吸光度A1;迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴中,準(zhǔn)確反應(yīng)2分鐘;迅速取出比色皿并擦干,記錄2分20秒時(shí)的吸光度A2。計(jì)算ΔA=A2-A1。
注意事項(xiàng):
1、若A2-A1大于0.5,需將酶液用提取液稀釋,使A2-A1小于0.5,可提高檢測(cè)靈敏度。
2、實(shí)驗(yàn)時(shí),試劑二、試劑三和樣本在冰上放置,以免變性和失活;試劑一37℃或25℃水浴放置。
3、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃,取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過(guò)程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
4、兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn),一個(gè)人比色,一個(gè)人計(jì)時(shí),以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)檢測(cè)試劑盒
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