標(biāo)題：組織及血液酸性磷酸酶（ACP）檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述

組織及血液酸性磷酸酶(ACP)檢測(cè)試劑盒

測(cè)定原理：

在酸性環(huán)境中，ACP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚，苯酚與4-氨基安替和鐵氰hua鉀反應(yīng)生成紅色亞醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通過(guò)測(cè)定510nm吸光度增加速率，來(lái)計(jì)算ACP活性。

自備儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，變成藍(lán)綠色不能使用。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支，2μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

粗酶液提取：

稱取約0.1g組織，加試劑一1mL充分研磨，4^oC、10000rpm離心10min，取上清液待測(cè)。血液可直接用于測(cè)定，如果濃度高的話，用試劑一稀釋。

測(cè)定：

1.分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到510 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于37 ^oC水浴中預(yù)熱30 min以上。

3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510 nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 對(duì)照管：取EP管，加入200μL試劑二，200μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四600μL，混勻；后加入20μL上清液，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A對(duì)照管。

6. 測(cè)定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。

其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管，測(cè)定管和對(duì)照管每個(gè)樣均需做。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑二、試劑三和試劑四均需避光保存。
2. 試劑四變藍(lán)綠色后不能再使用。
3. 加入試劑四后必須立即混勻，否則顯色不*。
4. ACP不穩(wěn)定，尤其在37℃和pH大于7的條件下活力喪失快，因此酸性磷酸酶樣品一般需當(dāng)天準(zhǔn)備；血清樣品中，每毫升血清中加入10mg檸檬酸氫二鈉或者5mg硫酸氫鈉，使pH降至6.5以下，或5ml血清加入30%醋酸溶液2～3滴，置于4℃可保存1周。

組織及血液酸性磷酸酶(ACP)檢測(cè)試劑盒