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描述:測定意義: AKP/ALP是一種含鋅的糖蛋白酶,在堿性環(huán)境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。AKP/ALP廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。 組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)檢測試劑盒
標題:組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)
產(chǎn)品概述
組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)檢測試劑盒
測定原理:
在堿性環(huán)境中,AKP/ALP催化磷酸苯二鈉生成游離酚;酚與4-氨基安替比林和鐵氰hua鉀反應紅色亞醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通過測定510 nm吸光度增加速率,來計算AKP活性。
自備儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:液體×1瓶,4℃避光保存,未變成藍綠色之前均可使用。
標準品:液體×1支(EP管中),2 μmol/mL酚標準液,4℃保存。
粗酶液提取:
準確稱取約0.1g組織,加試劑一1mL充分研磨,4℃、10000rpm離心10min,取上清液待測。血液可直接用于測定,或者適當稀釋后用于測定。
測定步驟:
1. 分光光度計預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到510 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30 min以上。
3. 空白管:取EP管,加入4μL蒸餾水,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A空白管。
4. 標準管:取EP管,加入4μL標準品,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A標準管。
5. 對照管: 取EP管,加入40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻;后加入4μL上清液,混勻后于510nm測定吸光度,記為A對照管。
6. 測定管:取EP管,加入4μL上清液,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A測定管。
其中標準管和空白管只需做一管,測定管和對照管每個樣均需做。
注意事項:
1.試劑二、試劑三和試劑四均需避光保存。
2.試劑四變藍綠色后不能再使用。
3.加入試劑四后必須立即混勻,否則顯色不*。
組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)檢測試劑盒
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