描述:測定意義SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷鍵,催化葡萄糖基轉移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等,合成相應的葡萄糖基低聚糖。此外,SP還能催化氫醌合成熊果苷,具有美白效果,在化妝品工業(yè)中具有重要應用。蔗糖磷酸化酶檢測試劑盒
標題:蔗糖磷酸化酶檢測試劑盒
產品概述
蔗糖磷酸化酶檢測試劑盒
測定原理
SP能夠以磷酸為受體,催化蔗糖產生1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸變位酶催化下變位為6-磷酸葡萄糖,在6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下還原NADP+生成NADPH,導致340nm光吸收值增加。測定340nm吸光度增加速率,即可計算SP活性。
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計、1 mL石英比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
緩沖液:液體40mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體25mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體2mL×1支,4℃保存。
試劑三:液體1mL×1支,4℃保存。
試劑四:粉劑1瓶,-20℃避光保存,臨用前加5mL雙蒸水溶解。
試劑五:粉劑1瓶,-20℃避光保存,臨用前加5mL雙蒸水溶解。
試劑六:粉劑1瓶,-20℃避光保存,臨用前加10mL雙蒸水溶解。
試劑七:粉劑1瓶,-20℃避光保存,臨用前加10mL雙蒸水溶解。
粗酶液提取
發(fā)酵液4℃,10000rpm,離心15min,取菌泥約0.5g,加入1mL提取液,用超聲波進行破碎,功率為300w,破碎3s,間歇5s,總時間為3min,然后4℃,12000rpm,離心10min,取20μL測定蛋白含量,其余的作為待測樣本。
測定操作表
| 對照管 | 測定管 |
緩沖液(μL) | 850 | 650 |
試劑一(μL) | 500 | 500 |
試劑二(μL) | 30 | 30 |
試劑三(μL) | 20 | 20 |
試劑四(μL) | 100 | 100 |
試劑五(μL) | 100 | 100 |
試劑六(μL) | 200 | 200 |
試劑七(μL) | 200 | 200 |
混勻,37℃水浴預熱5min | ||
樣本(μL) |
| 200 |
迅速混勻,于1mL石英比色皿,對照管調零,測定340nm的初始值A1,測定完立即放入37℃水浴準確反應2min,迅速測定340nm吸光值A2,△A= A2- A1。 |
注意事項
蔗糖磷酸化酶檢測試劑盒
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