標(biāo)題：乙酰輔酶A檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述

乙酰輔酶A檢測(cè)試劑盒

測(cè)定意義

乙酰輔酶A廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。是生物體能源物質(zhì)代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種重要的中間代謝產(chǎn)物。在體內(nèi)能源物質(zhì)代謝中是一個(gè)樞紐性的物質(zhì)。糖、脂肪、蛋白質(zhì)三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)通過(guò)乙酰輔酶A匯聚成一條共同的代謝通路-三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化，經(jīng)過(guò)這條通路*氧化生成二氧化碳和水，釋放能量用于ATP合成。此外，乙酰輔酶A是合成脂肪酸，酮體，膽固醇及其衍生物等生理活性物質(zhì)的前體物質(zhì)。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1支，-20℃保存。臨用前加入500uL試劑五充分溶解備用。

試劑三：液體×1支，4℃保存。臨用前加入500uL試劑五充分溶解備用。

試劑四：粉劑×1瓶，-20℃保存。臨用前加入45mL試劑五充分溶解備用。

試劑五：液體×1瓶，4℃保存。

工作液的配制：臨用前請(qǐng)根據(jù)擬用工作液體積（樣本數(shù)×0.92 m L），將試劑二、三和四按照1:1:90的比例混合，或者直接把試劑二和試劑三加入到試劑四中混勻（可以測(cè)定48樣）；加樣前置37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴鍋中預(yù)熱30 min。

乙酰輔酶A的提取

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，棄上清，按照每400萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一（如果吸光度太高，可以減少細(xì)菌或者細(xì)胞數(shù)量；如果吸光度太低，可以減少試劑一體積），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次），13000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、組織：稱取約0.1g組織（如果吸光度太高，可以減少組織質(zhì)量），加入1mL試劑一（如果吸光度太低，可以減少試劑一體積）進(jìn)行冰浴勻漿；13000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min，用蒸餾水于340nm處調(diào)零。

2、取920uL工作液和100uL樣本至 1mL石英比色皿，混勻，立即記錄340nm處20s的吸光值A1和80s時(shí)的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。

乙酰輔酶A檢測(cè)試劑盒