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描述:測(cè)定意義: ACK主要存在于微生物中,催化乙酸和ATP生成乙酰磷酸和ADP,是細(xì)菌碳代謝和能量代謝的關(guān)鍵酶,尤其是在古細(xì)菌甲烷合成代謝中起著中樞作用。乙酸激酶(ACK)檢測(cè)試劑盒
標(biāo)題:乙酸激酶(ACK)檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品概述
乙酸激酶(ACK)檢測(cè)試劑盒
測(cè)定原理:
(1)ACK催化乙酸鈉和ATP生成乙酰磷酸和ADP,(2)丙酮酸激酶催化ADP和PEP生成ATP和丙酮酸,(3)乳酸脫氫酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+,(4)在340nm下測(cè)定NADH氧化生成NAD+速率,即可反映ACK活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)/、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體18mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;
試劑三:液體×1支,4℃保存;
樣本的前處理:
1、細(xì)菌或細(xì)胞處理:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),15000g,4℃,離心20分鐘,取上清,置冰上待測(cè)。
2、組織處理:稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿;15000g ,4℃,離心20分鐘,取上清,置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟:
(1)工作液的配置,將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中,充分混合溶解,置于37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴5min;
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入20μL樣本和180μL工作液,混勻,立即記錄340nm處20s時(shí)的吸光值A1和 3min20s后的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。
乙酸激酶(ACK)檢測(cè)試劑盒
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