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描述:測(cè)定原理:蒽酮法。利用強(qiáng)堿性提取液提取糖原,在強(qiáng)酸性條件下利用蒽酮顯色劑測(cè)定糖原含量。糖原含量檢測(cè)試劑盒
標(biāo)題:糖原含量檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品概述
糖原含量檢測(cè)試劑盒
測(cè)定意義:
糖原是由葡萄糖單位構(gòu)成的高分子多糖,是糖的主要的儲(chǔ)存形式之一,主要貯存在肝和肌肉中作為備用能量,分別稱為肝糖原和肌糖原。肝糖原可調(diào)節(jié)血糖濃度,當(dāng)血糖升高時(shí)可在肝臟合成糖原,血糖降低時(shí),肝糖原則分解為葡萄糖以補(bǔ)充血糖。因此,肝糖原對(duì)維持血糖的相對(duì)平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的儲(chǔ)存形式,在劇烈運(yùn)動(dòng)消耗大量血糖時(shí),肌糖原不能直接分解成血糖,必須先分解產(chǎn)生乳酸,隨血液循環(huán)到肝臟,通過糖異生轉(zhuǎn)變?yōu)楦翁窃蚱咸烟恰?/span>
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、濃硫酸(不允許快遞)和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:0.1mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液 10mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×2瓶, 4℃保存;
工作液的配制:臨用前在每瓶試劑二中倒入5mL蒸餾水,緩慢倒入20mL濃硫酸,充分溶解混勻后使用。
糖原提?。?/span>
1﹑細(xì)胞或細(xì)菌:收集500萬細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;加入0.75mL提取液超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);轉(zhuǎn)移至10mL試管中,置于沸水浴中煮沸20min(蓋緊,防止水分散失),隔5min振搖試管1次,使充分混勻;取出試管冷卻后,用蒸餾水定容到5ml,混勻。
2﹑組織:稱取約0.2g樣品,置于10ml試管中;加入0.75ml提取液,置于沸水浴中煮沸20min(蓋緊,防止水分散失),隔5min振搖試管1次,使充分混勻;待組織全部溶解后,取出試管冷卻后,用蒸餾水定容到5ml,混勻。
步驟和加樣表(在1.5mLEP管中反應(yīng)):
試劑(uL) | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測(cè)定管 |
糖原提取液 |
|
| 250 |
試劑一 |
| 250 |
|
蒸餾水 | 250 |
|
|
試劑二 | 1000 | 1000 | 1000 |
混勻,置沸水中10min(蓋緊,防止水分散失),冷卻,于620nm波長(zhǎng)處,以蒸餾水調(diào)零,分別讀取空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管吸光度,分別記為A1、A2和A3。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要測(cè)一次。
糖原含量檢測(cè)試劑盒
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