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描述:測定意義SDH(EC 1.3.5.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中。SDH是線粒體的一種標志酶,位于線粒體內(nèi)膜上的一種膜結(jié)合酶,是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。此外,為多種原核細胞產(chǎn)能的呼吸鏈提供電子。琥珀酸脫氫酶(SDH)檢測試劑盒
標題:琥珀酸脫氫酶(SDH)檢測試劑盒
產(chǎn)品概述
琥珀酸脫氫酶(SDH)檢測試劑盒
測定原理
SDH催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸,脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸(PMS)傳遞還原2,6-二氯酚靛酚(DCPIP),并且在600nm處具有特征吸收峰,通過600nm吸光度的變化,測定2.6-DPIP的還原速度,代表SDH酶活性。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一:50mL×1瓶,-20℃保存;
試劑二:10mL×1瓶,-20℃保存;
試劑三:1mL×1支,-20℃保存;
試劑四:液體5mL×1瓶,4℃保存;
試劑五:粉劑×1支,4℃保存,臨用前加入2mL雙蒸水,用不完的試劑仍4℃保存;
試劑六:粉劑×1支,-20℃保存;臨用前加入2mL雙蒸水,用不完的試劑4℃保存。
SDH的提取
測定步驟和加樣表
試劑名稱(μL) | 測定管 |
試劑四 | 60 |
試劑五 | 30 |
蒸餾水 | 800 |
37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)保溫10min左右
樣本 | 30 |
試劑六 | 30 |
用蒸餾水調(diào)零后,依次加各試劑到1 mL玻璃比色皿中,在加入試劑六的同時開始計時;在600 nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1,比色后迅速將比色皿連同反應液一起放入37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴中,準確反應1分鐘;迅速取出比色皿并擦干,600 nm下比色,記錄1分20秒時的吸光度A2,計算ΔA=A1-A2。
注意事項
1、測定過程中所有試劑和樣本在冰上放置,以免變性失活。
2、比色皿中反應液的溫度必須保持37℃或25℃,取小燒杯一只裝入適量的37℃或25℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。
3、兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結(jié)果的準確性。
4、若ΔA大于0.5,需將酶液用酶提取液稀釋,使ΔA小于0.5,可提高檢測靈敏度。
琥珀酸脫氫酶(SDH)檢測試劑盒
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