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琥珀酸脫氫酶(SDH)檢測試劑盒

描述:測定意義
SDH(EC 1.3.5.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中。SDH是線粒體的一種標志酶,位于線粒體內(nèi)膜上的一種膜結(jié)合酶,是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。此外,為多種原核細胞產(chǎn)能的呼吸鏈提供電子。
琥珀酸脫氫酶(SDH)檢測試劑盒

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2019-11-07
  • 訪問量:389
產(chǎn)品詳情/ PRODUCT DETAIL

標題:琥珀酸脫氫酶(SDH)檢測試劑盒

產(chǎn)品概述

琥珀酸脫氫酶(SDH)檢測試劑盒

測定原理

SDH催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸,脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸(PMS)傳遞還原2,6-二氯酚靛酚(DCPIP),并且在600nm處具有特征吸收峰,通過600nm吸光度的變化,測定26-DPIP的還原速度,代表SDH酶活性。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一:50mL×1瓶,-20保存;

試劑二:10mL×1瓶,-20保存;

試劑三1mL×1支,-20保存;

試劑四:液體5mL×1瓶,4保存;

試劑五:粉劑×1支,4保存,臨用前加入2mL雙蒸水,用不完的試劑仍4保存;

試劑六:粉劑×1支,-20保存;臨用前加入2mL雙蒸水,用不完的試劑4保存。

SDH的提取

  1. 準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
  2. 4 600 g離心5min。
  3. 將上清液移至另一離心管中,4 11000 g離心10min
  4. 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的SDH(此步可選做)。
  5. 在沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復30次)用于線粒體SDH活性測定。

測定步驟和加樣表

 

試劑名稱μL

測定管

試劑四

60

試劑五

30

蒸餾水

800

37(哺乳動物)25(其它物種)保溫10min左右

樣本

30

試劑六

30

 

用蒸餾水調(diào)零后,依次加各試劑到1 mL玻璃比色皿中,在加入試劑六的同時開始計時;在600 nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1,比色后迅速將比色皿連同反應液一起放入37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴中,準確反應1分鐘;迅速取出比色皿并擦干,600 nm下比色,記錄120秒時的吸光度A2,計算ΔA=A1-A2。

注意事項

1、測定過程中所有試劑和樣本在冰上放置,以免變性失活。

2、比色皿中反應液的溫度必須保持37或25℃,取小燒杯一只裝入適量的37或25℃蒸餾水,將此燒杯放入37或25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。

3、兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結(jié)果的準確性。

4、若ΔA大于0.5,需將酶液用酶提取液稀釋,使ΔA小于0.5,可提高檢測靈敏度。

琥珀酸脫氫酶(SDH)檢測試劑盒

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