標(biāo)題：紅霉素-N-脫甲基酶（ERND）檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述

紅霉素-N-脫甲基酶(ERND)檢測(cè)試劑盒

測(cè)定原理：

ERND催化紅霉素釋放甲醛，通過Nash比色測(cè)定甲醛含量，即可計(jì)算出ERND活性。

自備儀器和用品：

普通離心機(jī)，超速離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水和冰。

試劑組成和配置：

試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加100mL蒸餾水溶解。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1管，4℃保存。臨用前加1mL蒸餾水，充分溶解。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加0.5mL蒸餾水，充分溶解。

試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前，加蒸餾水4.5mL充分溶解。

試劑六：液體×1瓶，4℃保存。

試劑七：液體×1瓶，4℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)液：液體×1瓶，-20℃保存。臨用前取1.5mL EP 管，加入10μl標(biāo)準(zhǔn)液，加990μl蒸餾水，混勻即為0.05 mmol/L標(biāo)準(zhǔn)甲醛溶液，4℃保存。

粗酶液提取：

1、除去細(xì)胞核，線粒體等大分子物質(zhì)：稱約0.5g組織，加入1mL試劑一，冰上充分研磨，10 000g 4℃離心30min，取上清液，轉(zhuǎn)入超速離心管中。

2、粗制微粒體：100 000g，4℃，離心60min，棄上清液。

3、除血紅蛋白等雜質(zhì)：向步驟2的沉淀中加1mL試劑一，蓋緊后充分震蕩溶解，100 000g離心30min，棄上清液。

4、終微粒體：向步驟3的沉淀中加試劑二0.5mL，充分震蕩溶解，即粗酶液，待測(cè)。該待測(cè)液需當(dāng)天使用。

測(cè)定：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到412 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于37℃水浴中預(yù)熱30 min以上。

3. 空白管：取0.5mL EP管，加入10μL粗酶液，170μL試劑二，10μL試劑三，10μL蒸餾水，混勻后置于37℃水浴保溫30min；立即加入35μL試劑五，混勻后置于冰浴中5min；取出后加入35μL試劑六，混勻后室溫靜置5min；室溫8000rpm離心5min；取新的EP管，加入100μL上清液，100μL試劑七，混勻后60℃水浴10min，然后取出，用冷水冷卻5min，于412nm測(cè)定光吸收，記為A空白管。每個(gè)樣品都需要做空白管。

4. 測(cè)定管：取0.5mL EP管，加入10μL粗酶液，170μL試劑二，10μL試劑三，10μL試劑四，混勻后置于37℃水浴保溫30min；立即加入35μL試劑五，混勻后置于冰浴中5min；取出后加入35μL試劑六，混勻后室溫靜置5min；室溫8000rpm離心5min；取新EP管，加入100μL上清液，100μL試劑七，混勻后60℃水浴10min，然后取出，用冷水冷卻5min，于412nm測(cè)定光吸收，記為A測(cè)定管。

5. 標(biāo)準(zhǔn)管：取0.5mL EP管，加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品，100μL試劑七，混勻后60℃水浴10min，然后取出，用冷水冷卻5min，于412nm測(cè)定光吸收，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

紅霉素-N-脫甲基酶(ERND)檢測(cè)試劑盒