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P產(chǎn)品分類RODUCT CATEGORY
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描述:測(cè)定意義蛋白質(zhì)羰基是多種氨基酸在蛋白質(zhì)的氧化修飾過(guò)程中的早期標(biāo)志,其含量高低表明蛋白質(zhì)氧化損傷程度的大小,是衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標(biāo)。測(cè)定原理羰基與2,4-二硝基苯肼反應(yīng)生成紅色2,4-二硝基苯腙,在370nm處有特征吸收峰。蛋白質(zhì)羰基檢測(cè)試劑盒
標(biāo)題:蛋白質(zhì)羰基檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品概述
蛋白質(zhì)羰基檢測(cè)試劑盒
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、漩渦震蕩儀、紫外分光光度計(jì)、1 mL石英比色皿和蒸餾水,無(wú)水乙醇,乙酸乙酯。
試劑組成和配制
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑0.1g×5支,4℃避光保存。(使用前根據(jù)樣品數(shù),每支加1mL水溶解,每支為10個(gè)樣品用量)
試劑二:液體20mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體20mL×1瓶,4℃保存。
試劑四:液體25mL×1瓶,4℃保存。
試劑五:根據(jù)測(cè)定樣品量,將乙酸乙酯和無(wú)水乙醇等體積混合。
試劑六:液體100mL×1瓶,4℃保存。
樣品處理
組織樣品:稱取約0.1g組織樣品,加入1mL提取液,充分勻漿后于4℃,5000rpm離心10min,取上清,加入0.1mL試劑一,室溫放置10min,4℃,12000rpm離心10min,取上清,然后取20μL測(cè)定蛋白含量,剩余的作為待測(cè)樣品。
測(cè)定步驟和操作表
| 空白管 | 測(cè)定管 |
樣品(mL) | 0.2 | 0.2 |
試劑二(mL) |
| 0.4 |
試劑三(mL) | 0.4 |
|
混勻,37℃避光反應(yīng)1h | ||
試劑四(mL) | 0.5 | 0.5 |
靜置5min,4℃,12000rpm離心15min,棄上清,留沉淀 | ||
試劑五(mL) | 1.0 | 1.0 |
漩渦混勻,4℃,12000rpm離心10min,棄上清,留沉淀 | ||
試劑五(mL) | 1.0 | 1.0 |
漩渦混勻,4℃,12000rpm離心10min,棄上清,留沉淀 | ||
試劑五(mL) | 1.0 | 1.0 |
漩渦混勻,4℃,12000rpm離心10min,棄上清,留沉淀 | ||
試劑六(mL) | 1.0 | 1.0 |
漩渦混勻,37℃溫育15min,沉淀全部溶解后,4℃,12000rpm離心15min,取上清,1mL石英比色皿,試劑六調(diào)零,測(cè)定OD370 |
計(jì)算公式
蛋白質(zhì)羰基含量(μmol/mg prot)= 227.27×(OD370測(cè)定管-OD370測(cè)定管)÷樣品蛋白質(zhì)濃度注意事項(xiàng):
1. 試劑一使用之前根據(jù)要測(cè)定的樣品數(shù)現(xiàn)配,配置好后4℃保存,若變?yōu)楹谏?,則不能使用。
2. 試劑二見光易分解,反應(yīng)需嚴(yán)格避光。
蛋白質(zhì)羰基檢測(cè)試劑盒
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