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描述:測(cè)定意義α-KGDH(EC 1.2.4.2)廣泛存在于動(dòng)物、植物微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,是三羧酸循環(huán)調(diào)控關(guān)鍵酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶A。測(cè)定原理α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和輔酶A生成琥珀酰輔酶A、 二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)檢測(cè)試劑盒
標(biāo)題:α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品概述
α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)檢測(cè)試劑盒
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一:50mL×1瓶,-20℃保存;
試劑二:10mL×1瓶,-20℃保存;
試劑三:1mL×1支,-20℃保存;
試劑四:液體55.5mL×1瓶,4℃保存;
試劑五:粉劑×1支,4℃保存;
試劑六:粉劑×1支,4℃保存;
試劑七:粉劑×1支,4℃保存;
試劑八:粉劑×1支,4℃保存;
試劑九:粉劑×1支,-20℃保存;
試劑十:粉劑×1支,-20℃保存;臨用前加入2.1mL雙蒸水充分混勻待用,用不完的試劑仍-20℃保存。
工作液的配制:臨用前把試劑五、試劑六、試劑七、試劑八和試劑九轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解待用。
α-KGDH的提取
測(cè)定步驟
用蒸餾水于340nm處調(diào)零。
1)取1.1mL工作液加入1mL石英比色皿,在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)孵育5min。
2)取出比色皿,再依次加入40μL試劑十和60μL樣本,混勻;加入樣本的同時(shí)開始計(jì)時(shí),立即記錄340nm處20s的吸光值A1,37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)中準(zhǔn)確反應(yīng)2min,記錄340nm處2min20s時(shí)的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A2-A1。
注意事項(xiàng)
1、測(cè)定過程中所有試劑和樣本在冰上放置,以免變性和失活。
2、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃,取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
3、兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn),一個(gè)人比色,一個(gè)人計(jì)時(shí),以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)檢測(cè)試劑盒
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