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描述:測定意義: α-GC(EC 3.2.1.20)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化水解芳基或烴基與糖基之間的α-糖苷鍵生成葡萄糖,不僅與細(xì)胞壁的松弛或加固有關(guān),而且與細(xì)胞識別和一些信號分子產(chǎn)生密切相關(guān)。α-葡萄糖苷酶(α-GC)檢測試劑盒
標(biāo)題:α-葡萄糖苷酶(α-GC)檢測試劑盒
產(chǎn)品概述
α-葡萄糖苷酶(α-GC)檢測試劑盒
測定原理:
α-GC分解對-硝基苯-α-D吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者在400nm有大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算α-GC活性。
自備用品:
可見分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×2瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入10mL雙蒸水,充分溶解備用;用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二:液體25mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體50mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的處理:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每400萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),15000g,4℃,離心20min,取上清,置冰上待測。
2、組織的處理:稱取約0.2g組織,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿;15000g,4℃,離心20min,取上清,置冰上待測。
測定步驟和加樣表:
試劑名稱(μL) | 測定管 | 對照管 |
試劑一 | 400 |
|
試劑二 | 500 | 500 |
樣本 | 100 | 100 |
充分混勻,放入37℃準(zhǔn)確水浴30min后,立即放入沸水浴中煮沸5min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻后充分混勻(以保證濃度不變)
試劑一 |
| 400 |
充分混勻,8000g,4℃,離心5min,取上清液
上清液 | 500 | 500 |
試劑三 | 1000 | 1000 |
充分混勻,室溫靜置2min后,用對照管調(diào)零,400nm處測定吸光值A
α-葡萄糖苷酶(α-GC)檢測試劑盒
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