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描述:測(cè)定原理:α-GAL分解對(duì)-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成對(duì)-硝基苯酚,后者在400nm有大吸收峰,通過(guò)測(cè)定吸光值升高速率來(lái)計(jì)算α-GAL活性。α-半乳糖苷酶(α-GAL)檢測(cè)試劑盒
標(biāo)題:α-半乳糖苷酶(α-GAL)檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品概述
α-半乳糖苷酶(α-GAL)檢測(cè)試劑盒
測(cè)定意義:
α-GAL (EC 3.2.1.22)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,能專一地催化α半乳糖苷鍵的水解,主要參與棉子糖、水蘇糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL對(duì)于植物種子的萌發(fā)至關(guān)重要,種子萌發(fā)初期,其催化產(chǎn)生的D-半乳糖通過(guò)糖酵解途徑迅速轉(zhuǎn)化和消耗,為種子的萌發(fā)提供初的能量來(lái)源,后期則主要參與細(xì)胞壁儲(chǔ)藏多糖水解。
自備用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入5mL雙蒸水,充分溶解備用;用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體50mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的處理:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每400萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),15000g,4℃,離心20分鐘,取上清,置冰上待測(cè)。
2、組織的處理:稱取約0.2g組織,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿;15000g,4℃,離心20min,取上清,置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟和加樣表(在1.5mLEP管中依次加入下列試劑):
試劑名稱(μL) | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
試劑一 | 200 |
|
蒸餾水 |
| 200 |
試劑二 | 250 | 250 |
樣本 | 50 | 50 |
迅速混勻,放入37℃準(zhǔn)確水浴30min
試劑三 | 1000 | 1000 |
充分混勻,室溫靜置2min后,用對(duì)照管調(diào)零,400nm處測(cè)定吸光值A
α-半乳糖苷酶(α-GAL)檢測(cè)試劑盒
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