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NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)檢測試劑盒

描述:測定意義:
MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸.
NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)檢測試劑盒

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2019-11-07
  • 訪問量:403
產(chǎn)品詳情/ PRODUCT DETAIL

標題:NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)檢測試劑盒

產(chǎn)品概述

NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)檢測試劑盒

測定意義:

MDH EC 1.1.1.37)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,線粒體中MDHTCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH分為NAD-依賴的MDHNADP-依賴的MDH,細菌中通常只含有NAD-MDH,在真核細胞中,NAD-MDH分布于細胞質(zhì)和線粒體中。

測定原理:
NAD-MDH催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸,導(dǎo)致340nm處光吸收下降。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

試劑一、提取液60 mL×1瓶,在4保存;

試劑二、液體50 mL×1瓶,在4保存;

試劑三、粉劑×2支,-20保存;臨用前加入300μL雙蒸水,用不完的試劑仍-20保存;

試劑四、粉劑×2支,-20保存;臨用前加入300μL雙蒸水,用不完的試劑仍-20保存。

樣本測定的準備:

1、 細菌、細胞或組織樣品的制備

細菌或培養(yǎng)細胞:收集細菌或細胞到離心管內(nèi),棄上清,按照每200萬細菌或細胞加入400μL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一進行冰浴勻漿;8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定操作表:

試劑名稱μL

測定孔

樣本

20

試劑二

760

試劑三

10

試劑四

10

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種),340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min的吸光度A2,計算ΔA=A1-A2

注意事項:

1、粗酶液的提取必須在0 - 4中操做完成,以防止酶變性失活。

2、實驗時,試劑三、試劑四和樣本在冰上放置,以免變性和失活。試劑二37℃或25室溫放置。

NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)檢測試劑盒

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