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描述:測定原理:NADP-MDH催化NADPH還原草酰乙酸生成蘋果酸,導(dǎo)致340nm處光吸收下降。NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)檢測試劑盒
標(biāo)題:NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)檢測試劑盒
產(chǎn)品概述
NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)檢測試劑盒
測定意義:
MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH在細(xì)胞多種生理活動中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH, NADP-MDH主要存在于真核細(xì)胞中。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一、提取液60 mL×1瓶,在4℃保存;
試劑二、液體50 mL×1瓶,在4℃保存;
試劑三、粉劑×2支,-20℃保存;臨用前加入300μL雙蒸水,用不完的試劑仍-20℃保存;
試劑四、粉劑×2支,-20℃保存;臨用前加入300μL雙蒸水,用不完的試劑仍-20℃保存。
樣本測定的準(zhǔn)備:
1、 細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備 :
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),棄上清,按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一進行冰浴勻漿;8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定操作表:
試劑名稱(μL) | 測定孔 |
樣本 | 20 |
試劑二 | 760 |
試劑三 | 10 |
試劑四 | 10 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種),340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2,計算ΔA=A1-A2。
注意事項:
1、粗酶液的提取必須在0℃ - 4℃中操做完成,以防止酶變性失活。
2、實驗時,試劑三、試劑四和樣本在冰上放置,以免變性和失活。試劑二37℃或25℃室溫放置。
NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)檢測試劑盒
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