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P產(chǎn)品分類RODUCT CATEGORY
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描述:測定意義:NADPase主要存在于植物組織中,是生物體內(nèi)催化NADP+降解為NAD+的酶,與NADK一起調(diào)控NAD和NADP之間的平衡。測定原理:NADPase能夠催化NADP+水解為NAD+和無機(jī)磷的反應(yīng),通過測定無機(jī)磷的量來測定NADPase活性。NADP磷酸酶(NADPase)檢測試劑盒
標(biāo)題:NADP磷酸酶(NADPase)檢測試劑盒
產(chǎn)品概述
NADP磷酸酶(NADPase)檢測試劑盒
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成和配制:
提取液:60mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體30 mL×1瓶, 4℃保存。
試劑二:粉劑×6支,-20℃保存;用時(shí)加入1 mL試劑一充分溶解備用,現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑三:粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時(shí)加入25mL雙蒸水,溶解后4℃可保存一周。
試劑四:粉劑×1瓶, 4℃保存。用時(shí)加入25mL雙蒸水,溶解后4℃可保存一周。
試劑五:液體 25mL×1 瓶,室溫保存。
試劑六:10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10mL×1 瓶,4℃保存。
0.5μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制:將試劑六20倍稀釋,即取 0.5mL試劑六加9.5蒸餾水,充分混勻1。
定磷試劑的配制:按H2O: 試劑三:試劑四:試劑五=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷試劑
應(yīng)為淺黃色,若無色則試劑失效,若是藍(lán)色則為磷污染,定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
注意:配試劑用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。
樣本的前處理:
稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
操作步驟:
1、酶促反應(yīng)
試劑名稱(μL) | 測定管 | 對照管 |
試劑一 | 300 | 300 |
試劑二 | 100 | 100 |
37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱5min
樣本 | 100 |
|
蒸餾水 |
| 100 |
37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)準(zhǔn)確反應(yīng)20min后,沸水浴5min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻后,10000g常溫離心5min,取上清
2、定磷
| 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | 測定管 | 對照管 |
0.5μmol/ml標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液 | 100 |
|
|
|
蒸餾水 |
| 100 |
|
|
上清液 |
|
| 100 | 100 |
定磷試劑 | 1000 |
| 1000 | 1000 |
混勻,37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴30min,冷卻至室溫,在 660nm處,蒸餾水調(diào)零,記錄各管吸光值
注意事項(xiàng):
1、此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對測定所用試管要求嚴(yán)格,要沒有一點(diǎn)磷,若試管放過磷酸或磷酸鹽緩沖液,一定要洗得非常干凈,要先用洗潔精加水煮,再用自來水沖,后用蒸餾水沖干凈。用一次性塑料管或新玻璃管,避免磷污染是檢測成敗的關(guān)鍵。
2、標(biāo)準(zhǔn)管、空白管和對照管只要做一次即可。
NADP磷酸酶(NADPase)檢測試劑盒
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