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Na+k+——ATP酶檢測試劑盒

描述:測定意義:
Na+K+- ATP酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細(xì)胞中,可催化ATP水解生成ADP和無機(jī)磷
Na+k+——ATP酶檢測試劑盒

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2019-11-07
  • 訪問量:748
產(chǎn)品詳情/ PRODUCT DETAIL

標(biāo)題:Na+k+——ATP酶檢測試劑盒

產(chǎn)品概述

Na+k+——ATP酶檢測試劑盒

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:液體50mL×1 瓶,4保存。

試劑一:液體 10mL×1 瓶,4保存。

試劑二:液體 5mL×1 瓶,4保存。

試劑三:液體 5ml×1 瓶,4保存。

試劑四:粉劑×3 支,-20保存。用時(shí)每支加1mL蒸餾水,現(xiàn)用現(xiàn)配。用不完的試劑-20可保存一周。

試劑五:液體 5mL×1 瓶,4保存。

試劑六:粉劑×1 瓶,4保存。用時(shí)加入3mL雙蒸水, 4保存。

試劑七:粉劑×1, 4保存。用時(shí)加入25mL雙蒸水,溶解后4保存一周。

試劑八:粉劑×1, 4保存。用時(shí)加入25mL雙蒸水,溶解后4保存一周。

試劑九: 液體 25mL×1 瓶,室溫保存。

試劑十:10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10mL×1 瓶,4保存。

0.5μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制:將貯備液 20倍稀釋,即取 0.1mL試劑十加1.9mL蒸餾水充分混勻。

定磷劑的配制:按H2O: 試劑七:試劑八:試劑九=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若無色則試劑失效,若是藍(lán)色則為磷污染,定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。

樣品酶液的制備:

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

操作步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至660nm,蒸餾水調(diào)零。

2、酶促反應(yīng)(在EP管中加入下列試劑)

 

對照管

測定管

試劑一(μL

130

90

試劑二(μL

40

40

試劑三(μL

40

40

試劑四(μL

40

40

試劑五(μL

 

40

樣品  μL

 

200

混勻,37(哺乳動物)或25(其他物種)準(zhǔn)確水浴10min

試劑六(μL

50

50

樣品(μL

200

 

混勻,4000g,常溫離心10min,取上清液

3定磷(1.5mLEP管中依次加入下列試劑)

 

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

A

B

0.5μmol/ml標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液(μL

 

100

 

 

上清液(μL

 

 

100

100

蒸餾水(μL

100

 

 

 

定磷試劑(μL

1000

1000

1000

1000

混勻,37水浴 30 min,冷卻至室溫,在 660nm處比色。

注意:

1、A管為對照管;B管為Na+K+-ATP酶測定管;

2、由于每一個(gè)樣都必須做對照,本試劑盒50管保證測 24Na+K+-ATP酶。

3、此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對測定所用試管要求嚴(yán)格無磷。

4、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管。

Na+k+——ATP酶檢測試劑盒

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