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P產(chǎn)品分類RODUCT CATEGORY
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描述:測定意義AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中,催化葡萄糖-1-磷酸與ATP反應生成淀粉合成的直接前體ADPG,是植物淀粉生物合成的主要限速步驟。測定原理AGP催化的逆向反應生成G1P,在反應體系中添加的磷酸己糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH,340nm下測定NADPH增加速率,即可計算AGP活性。ADPG焦磷酸化酶(AGP)檢測試劑盒
標題:ADPG焦磷酸化酶(AGP)檢測試劑盒
產(chǎn)品概述
ADPG焦磷酸化酶(AGP)檢測試劑盒
需自備的的儀器和用品
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體20mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×2支,4℃保存;臨用前每支加入250μL雙蒸水充分溶解備用;用不完的試劑仍4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入3mL雙蒸水充分溶解備用;用不完的試劑仍4℃保存;
試劑四:粉劑×2瓶,4℃保存;臨用前每瓶加入3mL雙蒸水充分溶解備用;用不完的試劑仍4℃保存;
試劑五:粉劑×2瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入3mL雙蒸水充分溶解備用;用不完的試劑仍-20℃保存;
試劑六:粉劑×2支,-20℃保存;臨用前每支加入250μL雙蒸水充分溶解備用;用不完的試劑4℃保存;
試劑七:粉劑×2支,-20℃保存;臨用前每支加入250μL雙蒸水充分溶解備用;用不完的試劑4℃保存;
粗酶液制備
稱取約0.1g組織加入1mL提取液,冰浴中勻漿。10000g ,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟
試劑名稱(μL) | 測定管 |
試劑一 | 100 |
試劑二 | 10 |
試劑三 | 50 |
試劑四 | 100 |
樣本 | 20 |
混勻,30℃保溫15 min,置沸水浴中1 min(蓋緊,防止水分散失),冰浴迅速冷卻
試劑五 | 100 |
試劑一 | 300 |
試劑六 | 10 |
試劑七 | 10 |
混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2,計算ΔA=A2-A1。
AGP活性計算
1、按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個酶活性單位。
AGP活性(U/mg prot)=反應總體積(700μL )÷樣本體積(20μL )÷反應時間(2min)÷NADPH消光系數(shù)(6.22×10-3)×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度(mg/mL)=2813×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度(mg/mL)。
此法需要自行測定粗酶液蛋白質(zhì)濃度。
2、按照樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
AGP活性(U/g 鮮重)=反應總體積(700μL )÷樣本體積(20μL )÷反應時間(2min)÷NADPH消光系數(shù)(6.22×10-3)×ΔA ÷樣本鮮重(g/mL) =2813×ΔA÷樣本鮮重(g/mL)
ADPG焦磷酸化酶(AGP)檢測試劑盒
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