教你應(yīng)如何應(yīng)對液相色譜有氣泡

1.  故障原因：流通池是易積存氣泡的地方，其對基線影響較大，流動相流入色譜柱后，壓力越來越小，微小氣泡將逐漸長大，而流通池截面積相對較大，則氣泡在池內(nèi)易長大，在無外壓的情況下，很難縮小到管路內(nèi)徑以下流出流通池，從而存在了池內(nèi)，導(dǎo)致基線很亂。



故障排除：在廢液出口處加反壓調(diào)節(jié)器（壓力一般在150psi左右），為流通池提供一個背壓；其次是用手指堵廢液管出液端，眼看泵柱壓上升（約2-3s），松開，且同時看檢測器顯示屏上吸光度值的變化。如果池內(nèi)有氣泡，則手指堵廢液管，吸光度值將劇烈變化，當(dāng)手松開后吸光度值再次大步上升，證明池內(nèi)有氣泡但沒有排掉，當(dāng)手指堵住和松開廢液管時，吸光度值基本不變時，證明排汽泡成功，再觀察基線將穩(wěn)定（此過程需要重復(fù)10-20次）。

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2. 故障原因：溶劑濾頭污染，導(dǎo)致泵在吸液過程中吸力不均勻而強(qiáng)制吸液從而產(chǎn)生微小的真空氣泡。此時會觀察到進(jìn)液管壁上分布許多很小的氣泡，有的在動有的停留在管壁上，或者感覺流速比設(shè)定值小，壓力也不穩(wěn)。



故障排除：先觀察現(xiàn)象確認(rèn)，再排除。用5%—10%的稀硝酸浸泡過夜（怕超聲的濾頭）或者超聲處理數(shù)小時（可以超聲的濾頭），然后用純水浸泡過夜或者超聲處理，注意換水多處理幾次，洗掉酸的殘留，zui后用有機(jī)相甲醇浸泡處理或者超聲即可。若上述處理未果，需更換新的溶劑濾頭。



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3. 故障原因：流動相放好后，沒有排氣，就開始運(yùn)行泵，易產(chǎn)生氣泡。



故障排除：放好流動相后，打開旁通閥，用注射器慢慢吸液，觀察進(jìn)液管無氣泡后再吸10ml將流路中的空氣驅(qū)趕干凈，旋緊旁通閥后再運(yùn)行泵，或者是打開旁通閥大流速排液，觀察進(jìn)液管無氣泡后，再排氣2min將流路中的空氣驅(qū)趕干凈，旋緊旁通閥后再運(yùn)行泵。



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4. 故障原因：單向閥或者泵頭內(nèi)部污染。（泵的壓力波動一般在100psi以上就要考慮了）泵頭是壓力變化劇烈的地方，也是易產(chǎn)生氣泡的地方，泵頭靠負(fù)壓而吸液，而負(fù)壓必然使流動相中的小氣泡長大，當(dāng)泵腔變正壓時，已長大的氣泡未必能全部變小流入后續(xù)液路，則泵腔內(nèi)將積存氣泡，從而影響吸液精度。



故障排除：小心拆下泵頭，用甲醇超聲清洗單向閥以及內(nèi)部密封圈和泵頭整體，用棉花沾甲醇擦拭柱塞桿。必要時更換單向閥，密封圈，柱塞桿等。



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5. 故障原因：進(jìn)樣時帶入氣泡，吸樣時帶到進(jìn)樣針中氣泡



故障排除：在進(jìn)樣前，注意排出進(jìn)樣針里的空氣，將進(jìn)樣針頭垂直向上，用手指墊上濾紙摁住針頭處，往上推，氣泡很容易就上去了，排出即可。



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6. 故障原因：色譜柱進(jìn)氣泡。



故障排除：用純甲醇低流速（0.2-0.3ml/min）長時間沖洗反相色譜柱，隨后可逐步加大流速，zui大加到1ml/min，直至色譜柱壓力穩(wěn)定?；蛘吒鼡Q色譜柱。



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7.故障原因：溶劑混合時，由于兩種液體熱力學(xué)體積的變化，會產(chǎn)生氣泡；混合時放熱或者吸熱易產(chǎn)生氣泡，比如：甲醇和水混合屬于放熱，乙腈和水混合屬于吸熱。通常用量筒混合后明顯看到體積的增減，而且有許多小氣泡產(chǎn)生，掛在瓶壁上，或者晃一下可以看到許多小氣泡存在液體中。



故障排除：對溶劑過濾，超聲脫氣（常用），尤其是乙腈和水混合后，超聲脫氣時間要長一些，也可以通過其他方法脫氣，例如安裝在線脫氣機(jī)，充氮脫氣等。處理好的液體在使用過程中應(yīng)該保持室內(nèi)溫度恒定。