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介紹實驗室緩沖液配置
在食品檢驗理化實驗室里各種各樣的緩沖液都需要自行配置,在我們?nèi)粘5臏?zhǔn)備過程中都需要對緩沖液進(jìn)行準(zhǔn)備,緩沖液對我們?nèi)粘5那疤幚碛泻艽蟮挠绊?,緩沖液配置也是食品檢驗中一種很重要的過程,以下是食品檢驗資格證培訓(xùn)小編總結(jié)的常用緩沖液配置方法,以供各位學(xué)員自行學(xué)習(xí)和配置。
苯酚/氯-仿/異戊醇 (25 : 24 : 1)
配制方法:1. 說明:從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時常常使用苯酚/氯-仿/異戊醇(25 : 24 : 1)。氯-仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離,而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。2. 配制方法:將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯-仿/異戊醇(24 : 1)混合均勻后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)
組份濃度:1 M Tris-HCl 配制量:1 L
配制方法:1. 稱量121.1 g Tris置于1 L燒杯中。2. 加入約800 ml的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。4. 將溶液定容至1 L。5. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。
注意:應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值,因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個單位。
Solution II(質(zhì)粒提取用)
組份濃度:200mM NaOH,1%(W/V)SDS 配制量:500ml
配制方法:1.量取下列溶液,置于500ml燒杯中,10% SDS 50ml,2N NaOH 50ml2.加滅菌水定容至500ml,充分混勻3.室溫保存,此溶液保存時間zui-好不要超過一個月,注意:SDS易產(chǎn)生氣泡,不要劇烈攪拌
Solution III(質(zhì)粒提取用)
組份濃度:3 M KOAc, 5 M CH3COOH 配制量:500 ml
配制方法:1. 稱量下列試劑,置于500 ml燒杯中。KOAc 147g、CH3COOH57.5ml2. 加入300 ml去離子水后攪拌溶解。3. 加去離子水將溶液定容至500 ml。4. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
0.5 M EDTA(pH8.0)
組份濃度:0.5 M EDTA 配制量:1 L
配制方法:稱取186.1 g Na2EDTA·2H2O,置于1 L燒杯中。2. 加入約800 ml的去離子水,充分?jǐn)嚢琛?. 用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0(約20 g NaOH)。注意:pH值至8.0時,EDTA才能*溶解。4. 加去離子水將溶液定容至1 L。5. 適量分成小份后,高溫高壓滅菌。6. 室溫保存。
3 M 醋酸鈉(pH5.2)
組份濃度:3M 醋酸鈉,配制量:100ml
配制方法:1.稱量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml燒杯中,加入月40ml的去離子水?dāng)嚢枞芙?.加入冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.23.加去離子水將溶液定容至100ml4高溫高壓滅菌后,室溫保存。
PBS Buffer
組份濃度:137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4,配制量:1 L
配制方法:1. 稱量下列試劑,置于1 L燒杯中。NaCl8g、KCl0.2g、Na2HPO41.42g、KH2PO40.27g2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至7.4,然后加入去離子水將溶液定容至1 L。4. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。注意:上述PBS Buffer中無二價陽離子,如需要,可在配方中補(bǔ)充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)
組份濃度:100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量:1 L
配制方法:1. 量取下列溶液,置于1 L燒杯中。1M Tris-HCl Buffer(PH7.4,7.6,8.0)100ml500mM EDTA(PH8.0)20ml2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水,均勻混合。3. 將溶液定容至1 L后,高溫高壓滅菌。4. 室溫保存。
2 N NaOH
組份濃度:2 N NaOH 配制量:100 ml
配制方法:1. 量取80 ml去離子水置于100~200 ml塑料燒杯中(NaOH溶解過程中大量放熱,有可能使玻璃燒杯炸裂)。2. 稱取8 g NaOH小心地逐漸加入到燒杯中,邊加邊攪拌。3. 待NaOH*溶解后,用去離子水將溶液體積定容至100 ml。4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后,室溫保存。
Solution I(質(zhì)粒提取用)
組份濃度:25 mM Tris-HCl(pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose,配制量:1 L
配制方法:1. 量取下列溶液,置于1 L燒杯中。1M Tris-HCl(PH8.0)25ml,0.5M EDTA(PH8.0)20ml,20%Glucose(1.11M)45ml,dH2O910ml2. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A(20 mg/ml)。
2.5 N HCl
組份濃度:2.5 N HCl 配制量:100 ml
配制方法:1. 在78.4 ml的去離子水中加入21.6 ml的濃鹽酸(11.6 N),均勻混合。2. 室溫保存。
5 M NaCl
組份濃度:5 M NaCl 配制量:1 L
配制方法: 1. 稱取292.2 g NaCl置于1 L燒杯中,加入約800 ml的去離子水后攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至1 L后,適量分成小份。3. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
20% (W/V) Glucose
組份濃度:20% (W/V) Glucose,配制量:100 ml
配制方法:1. 稱取20 g Glucose置于100~200 ml燒杯中,加入約80 ml的去離子水后,攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。3. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
10% (W/V) SDS
組份濃度:10% (W/V)SDS、配制量:100ml
配制方法:1.稱量10g高純度的SDS置于100-200ml燒杯中,加入約80ml的去離子水,68℃加入溶解2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.23.將溶液定容至100ml后,室溫保存。
1 M DTT
組份濃度:1 M DTT 配制量:20 ml
配制方法:1. 稱取3.09 g DTT,加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。2. 加20 ml的0.01 M NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22 mm濾器過濾除菌。3. 適量分成小份后,-20℃保存。
10 mM ATP
組份濃度:10 mM ATP 配制量:20 ml
配制方法:1. 稱取121 mg Na2ATP·3H2O,加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl(pH8.0),攪拌溶解。3. 適量分成小份后,-20℃保存。
1.5 M Tris-HCl (pH8.8)
組份濃度:1.5 M Tris-HCl,配制量:1 L
配制方法:1. 稱量181.7 g Tris置于1 L燒杯中。2. 加入約800 ml的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.8。4. 將溶液定容至1 L。5. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。
注意:應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值,因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個單位。
10 M 醋酸銨
組份濃度:10 M 醋酸銨、配制量:100 ml
配制方法:1. 稱量77.1 g醋酸銨置于100~200 ml燒杯中,加入約30 ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?. 加去離子水將溶液定容至100 ml。3. 使用0.22 mm濾膜過濾除菌。4. 密封瓶口于室溫保存。注意:醋酸銨受熱易分解,所以不能高溫高壓滅菌。
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