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測定意義:
ACP在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無機(jī)磷酸,常見于巨噬細(xì)胞的溶酶體內(nèi)。ACP常用于前列腺癌的輔助診斷。
測定原理:
在酸性環(huán)境中,ACP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚,苯酚與4-氨基安替和鐵氰化甲反應(yīng)生成紅色亞醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通過測定510nm吸光度增加速率,來計算ACP活性。
自備儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:液體×1瓶,4℃避光保存,變成藍(lán)綠色不能使用。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體×1支,2μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
稱取約0.1g組織,加試劑一1mL充分研磨,4oC、10000rpm離心10min,取上清液待測。血液可直接用于測定,如果濃度高的話,用試劑一稀釋。
測定:
1.分光光度計預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長到510 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于37 oC水浴中預(yù)熱30 min以上。
3. 空白管:取EP管,加入4μL蒸餾水,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510 nm測定吸光度,記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管:取EP管,加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 對照管:取EP管,加入200μL試劑二,200μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四600μL,混勻;后加入20μL上清液,混勻后于510nm測定吸光度,記為A對照管。
6. 測定管:取EP管,加入4μL上清液,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A測定管。
其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管,測定管和對照管每個樣均需做。
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