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描述:產(chǎn)品名稱 :線粒體提取試劑盒英文名稱 :mitochondrial extraction kit產(chǎn)品貨號 :YX21220產(chǎn)品規(guī)格 :50T 儲存條件:2-8℃有效期:12個(gè)月 本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用,不做其他用途。
標(biāo)題:線粒體提取試劑盒
產(chǎn)品概述
產(chǎn)品名稱 :線粒體提取試劑盒
英文名稱 :mitochondrial extraction kit
產(chǎn)品貨號 :YX21220
產(chǎn)品規(guī)格 :50T
儲存條件:2-8℃
有效期:12個(gè)月
產(chǎn)品介紹:
線粒體提取試劑盒用于從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的線粒體。適合于動(dòng)物軟組織(肝或腦組織)和硬組織(肌肉)以及培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體的制備。其制備物產(chǎn)量高,可以被用于細(xì)胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。
操作步驟:
1. 樣本處理 a. 組織勻漿:稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等,PBS或生理鹽水沖洗,洗凈血水,濾紙吸干,用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer,0℃冰浴上下研磨組織20次; b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿:消化細(xì)胞,PBS洗滌,800g離心5~10 min收集細(xì)胞,計(jì)數(shù)。每次提取需要5×107個(gè)細(xì)胞,加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi),0℃冰浴研磨30~40次。
2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管,4℃,1000g 離心5 min。
3. 取上清,轉(zhuǎn)移至新的離心管中,4℃,1000g再次離心5 min。
4. 取上清,轉(zhuǎn)移至新的離心管中,4℃, 12,000 g 離心10 min。離心后的上清含胞漿成分,可從中提取胞漿蛋白。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管,線粒體沉淀在管底。
5. 往線粒體沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重懸線粒體沉淀,4℃,1000 g 離心5 min。
6. 取上清,轉(zhuǎn)移至新的離心管中,4℃, 12,000 g 離心10 min。棄上清,高純度的線粒體沉淀在管底。
7. 用50 -100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸線粒體沉淀,立即使用或-70℃保存。
注意事項(xiàng):
1. 為保證獲得完整的線粒體,務(wù)必做到:第一,全程低溫操作;第二,快速;第三,在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞,這是制備線粒體的最關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比,培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃勻漿器勻漿時(shí)較難破壁,因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。
2. 以離心力g計(jì)算正確的離心速度,不同的離心機(jī)可據(jù)此精確計(jì)算離心速度。3. 進(jìn)行Western Blot和2D-膠電泳,可直接加入上樣緩沖液裂解線粒體。 轉(zhuǎn)速與離心力換算: G=1.11×(10-5)×R×[rpm]2 G為離心力,一般以g(重力加速度)的倍數(shù)來表示; [rpm]2即:轉(zhuǎn)速的平方; R為半徑,單位為厘米。
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