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P產(chǎn)品分類(lèi)RODUCT CATEGORY
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描述:由于它的高效價(jià),IgM比其他同種型更有效地結(jié)合抗原和重復(fù)表位(病毒顆粒和紅細(xì)胞),并且比IgG更有效地激活補(bǔ)體途徑。HRP標(biāo)記的羊抗人IgM
標(biāo)題:HRP標(biāo)記的羊抗人IgM
產(chǎn)品概述
HRP標(biāo)記的羊抗人IgM
本產(chǎn)品僅用于研究用途,不用于人類(lèi)、治療或診斷應(yīng)用。
抗體來(lái)源 | Goat |
克隆類(lèi)型 | Polyclonal |
交叉反應(yīng) | hu |
產(chǎn)品應(yīng)用 | WB=1:1000-10000 ELISA=1:1000-10000 IHC-P=1:100-1000 IHC-F=1:100-1000 not yet tested in other applications. optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user. |
分 子 量 | 900kDa |
性 狀 | Lyophilized or Liquid |
濃 度 | 2mg/1ml |
免 疫 原 | Full length plasma protein: |
亞 型 | IgG |
純化方法 | affinity purified by Protein A |
儲(chǔ) 存 液 | 0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol. |
保存條件 | Storage: Store at –20 oC for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20oC. When reconstituted in sterile distilled water or diluent supplied, theantibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C. |
經(jīng)典的過(guò)碘酸鈉法中需采用二硝基氟苯封閉HRP上殘留的α-和ε氨基基以避免酶分子之間的交聯(lián)。后來(lái)Wilson等改用在低PH下使NaIO4氧化HRP,從而省去了二硝基氟苯封閉HRP步驟。HRP經(jīng)NaIO4氧化后形成的醛化酶可與抗體分子的氨基相連,形成斯夫氏鹼,后者可進(jìn)一步用NaBH4(或乙醇胺)還原生成穩(wěn)定的酶標(biāo)記抗體。
HRP標(biāo)記的羊抗人IgM
主要試劑
1. 0.1M NaIO4:稱(chēng)取241mg高碘酸鈉(廣州化學(xué)試劑廠,批號(hào)830602)溶于蒸餾水10ml中。
2. 1mM PH4.4醋酸鈉緩沖液:0.2M NaAc (1.361克/50ml) 3.7ml;0.2M HAc (0.601ml/50ml) 6.3ml;加蒸餾水至2,000ml。
3. 0.2M PH9.5碳酸鹽緩沖液:Na2CO3 0.32g;NaHCO3 0.586g;加蒸餾水至50ml,再用蒸餾水作20倍稀釋?zhuān)闯?.01M PH9.5的碳酸鹽緩沖液。
4. NaBH4溶液(4mg/ml):臨用時(shí)稱(chēng)取NaBH4 4mg溶于1ml蒸餾水中。
5. 其它的試劑及器材可參見(jiàn)戊二醛標(biāo)記法。
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 稱(chēng)取5mgHRP溶解于1ml蒸餾水中。
2. 于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液,室溫下避光攪拌20分鐘。
3. 將上述溶液裝入透析袋中,對(duì)1mM PH4.4的醋酸鈉緩沖液透析,4℃過(guò)夜。
4. 加20μl 0.2M PH9.5碳酸鹽緩沖液,使以上醛化桯RP的PH升高到9.0-9.5,然后立即加入10mg IgG(抗體,或SPA 5mg)在1ml 0.01M碳酸鹽緩沖液中,室溫避光輕輕攪拌2小時(shí)。
5. 加0.1ml新配的4mg/ml NaBH4液,混勻,再置4℃ 2小時(shí)。
6. 將上述液裝入透析袋中,對(duì)0.15M PH7.4 PBS透析,4℃過(guò)夜。
7. 在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨,置4℃ 1小時(shí)。
8. 3000rpm離心半小時(shí),棄上清。沉淀物用半飽和硫酸銨洗二次,ZUI后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。
9. 將上述溶液裝入透析袋中,對(duì)0.15M PH7.4的PBS緩沖鹽水透析,去除銨離子后(用萘氏試劑檢測(cè)),10,000rpm離心30分鐘去除沉淀,上清液即為酶結(jié)合物,分裝后,冰凍保存。
10. 結(jié)果判定
除標(biāo)記物IgG量的計(jì)算,略有不同以外,其余均同戊二醛法。
IgG量(mg/ml)=(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62
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