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結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)檢測試劑盒

描述:測定意義
GBSS(EC 2.4.1.21)以束縛態(tài)存在于淀粉體中,催化淀粉鏈的加長反應,主要負責直鏈淀粉的合成。
結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)檢測試劑盒

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2019-11-07
  • 訪問量:749
產(chǎn)品詳情/ PRODUCT DETAIL

標題:結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)檢測試劑盒

產(chǎn)品概述

結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)檢測試劑盒

測定原理

GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應,將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上,同時生成ADP;進一步通過反應體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH,其中NADPH生成量與前一步反應生成的ADP數(shù)量呈正比,通過340nm下測定NADPH的增加量,可以計算GBSS活性。

需自備的的儀器和用品

紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

提取液液體60mL×2瓶,4保存;

液體一:7mL×2瓶,4保存;

液體二:4mL×2瓶,4保存;

液體三:8mL×2瓶,4保存;

粉劑一:2支,4保存;

粉劑二:2支,4保存;

粉劑三:2支,-20保存;

粉劑四:2支,4保存;

粉劑五:2支,4保存;

粉劑六:2支,-20保存;

粉劑七:2支,-20保存;

粉劑八:2支,4保存;

粉劑九:2支,4保存;

粉劑十:2支,-20保存;

試劑一:粉劑×1支,-20保存;臨用前加入500μL雙蒸水,充分溶解備用,用不完的試劑4保存;

試劑二:粉劑×1支,-20保存;臨用前加入500μL雙蒸水,充分溶解備用,用不完的試劑4保存;

反應液Ⅰ的配制:臨用前取液體一、粉劑一、粉劑二和粉劑三各一支,依次把粉劑一、粉劑二和粉劑三轉(zhuǎn)移到液體一中混合溶解。這樣可以分兩批配制并且測定。

反應液Ⅱ的配制:臨用前取液體二、粉劑四、粉劑五、粉劑六和粉劑七各一支,依次把粉劑四、粉劑五、粉劑六和粉劑七轉(zhuǎn)移到液體二中混合溶解。這樣可以分兩批配制并且測定。

反應液Ⅲ的配制:臨用前取液體三、粉劑八、粉劑九和粉劑十各一支,依次把粉劑八、粉劑九和粉劑十轉(zhuǎn)移到液體三中混合溶解。這樣可以分兩批配制并且測定。

粗酶液制備

稱取約0.1g組織加入1mL提取液,冰浴中勻漿。10000g 4離心10min,棄上清,在沉淀中加入1mL提取液充分混勻,置冰上待測。

測定步驟

試劑名稱μL

測定管

樣本

150

反應液Ⅰ

270

混勻,30保溫20 min,置沸水浴中1 min(蓋緊,防止水分散失),冰浴冷卻

反應液Ⅱ

150

混勻,30保溫30 min,置沸水浴中1 min(蓋緊,防止水分散失),

冰浴冷卻,10000g 常溫離心10min,取上清液

上清液

450

反應液Ⅲ

300

試劑一

10

試劑二

10

混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1 2min后的吸光度A2,計算ΔA=A2-A1。

注意:反應液Ⅰ如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混勻。

結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)檢測試劑盒

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