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描述:測定意義GBSS(EC 2.4.1.21)以束縛態(tài)存在于淀粉體中,催化淀粉鏈的加長反應,主要負責直鏈淀粉的合成。結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)檢測試劑盒
標題:結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)檢測試劑盒
產(chǎn)品概述
結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)檢測試劑盒
測定原理
GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應,將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上,同時生成ADP;進一步通過反應體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH,其中NADPH生成量與前一步反應生成的ADP數(shù)量呈正比,通過340nm下測定NADPH的增加量,可以計算GBSS活性。
需自備的的儀器和用品
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液:液體60mL×2瓶,4℃保存;
液體一:7mL×2瓶,4℃保存;
液體二:4mL×2瓶,4℃保存;
液體三:8mL×2瓶,4℃保存;
粉劑一:2支,4℃保存;
粉劑二:2支,4℃保存;
粉劑三:2支,-20℃保存;
粉劑四:2支,4℃保存;
粉劑五:2支,4℃保存;
粉劑六:2支,-20℃保存;
粉劑七:2支,-20℃保存;
粉劑八:2支,4℃保存;
粉劑九:2支,4℃保存;
粉劑十:2支,-20℃保存;
試劑一:粉劑×1支,-20℃保存;臨用前加入500μL雙蒸水,充分溶解備用,用不完的試劑4℃保存;
試劑二:粉劑×1支,-20℃保存;臨用前加入500μL雙蒸水,充分溶解備用,用不完的試劑4℃保存;
反應液Ⅰ的配制:臨用前取液體一、粉劑一、粉劑二和粉劑三各一支,依次把粉劑一、粉劑二和粉劑三轉(zhuǎn)移到液體一中混合溶解。這樣可以分兩批配制并且測定。
反應液Ⅱ的配制:臨用前取液體二、粉劑四、粉劑五、粉劑六和粉劑七各一支,依次把粉劑四、粉劑五、粉劑六和粉劑七轉(zhuǎn)移到液體二中混合溶解。這樣可以分兩批配制并且測定。
反應液Ⅲ的配制:臨用前取液體三、粉劑八、粉劑九和粉劑十各一支,依次把粉劑八、粉劑九和粉劑十轉(zhuǎn)移到液體三中混合溶解。這樣可以分兩批配制并且測定。
粗酶液制備
稱取約0.1g組織加入1mL提取液,冰浴中勻漿。10000g ,4℃離心10min,棄上清,在沉淀中加入1mL提取液充分混勻,置冰上待測。
測定步驟
試劑名稱(μL) | 測定管 |
樣本 | 150 |
反應液Ⅰ | 270 |
混勻,30℃保溫20 min,置沸水浴中1 min(蓋緊,防止水分散失),冰浴冷卻
反應液Ⅱ | 150 |
混勻,30℃保溫30 min,置沸水浴中1 min(蓋緊,防止水分散失),
冰浴冷卻,10000g 常溫離心10min,取上清液
上清液 | 450 |
反應液Ⅲ | 300 |
試劑一 | 10 |
試劑二 | 10 |
混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2,計算ΔA=A2-A1。
注意:反應液Ⅰ如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混勻。
結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)檢測試劑盒
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