描述:測定意義:THL(EC 3.2.1.28)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中。海藻糖酶主要功能在于生物體分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供應。測定原理:采用3.5-二硝基水楊酸法測定THL催化海藻糖產生的還原糖的含量。還原糖與3.5-二硝基水楊酸共熱生成棕紅色的氨基化合物,在一定范圍內還原糖的量和反應液的顏色深度成正比,由此判斷THL活性的高低。海藻糖酶檢測試劑盒
標題:海藻糖酶檢測試劑盒
產品概述
海藻糖酶檢測試劑盒
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體20mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶 ,4℃保存,用時加入2.5mL試劑一,充分溶解,現(xiàn)配先用;
試劑三:液體20mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體20mL×1瓶,常溫保存;
樣品測定的準備:
1、細菌或細胞:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照每400萬細菌或細胞加入1mL提取液充分勻漿以破碎并裂解細胞(功率20%,超聲3S秒,間隔10S,重復30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:稱取約0.1g組織加入1mL提取液,冰浴中勻漿。8000g ,4℃下離心10min,取上清,置冰上待測。
加樣表和測定步驟(在1.5mLEP管中依次加入下列試劑):
試劑名稱(μL) | 對照管 | 測定管 |
樣本 | 180 | 180 |
試劑一 | 300 | 220 |
試劑二 |
| 80 |
37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴,準確反應時間10min
試劑三 | 400 | 400 |
試劑四 | 400 | 400 |
混勻, 100℃煮沸5min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻后,對照管調零,測定550nm處測定管吸光值。
海藻糖酶檢測試劑盒
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