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描述:測定意義:核酮糖-1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶(EC 4.1.1.39)是植物光合作用中的一個關(guān)鍵酶,既控制著CO2的固定,同時又制約著碳素向Calvin循環(huán)和光呼吸循環(huán)分流,其活性的大小直接影響著光合速率。二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)檢測試劑盒
標(biāo)題:二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)
產(chǎn)品概述
二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)檢測試劑盒
測定原理:
在Rubisco的催化下,1分子的核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)與1分子的CO2結(jié)合,產(chǎn)生2分子的3-磷酸甘油酸(PGA),PGA可通過外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶的作用,產(chǎn)生甘油醛-3-磷酸,并使還原型輔酶I(NADH)氧化。因此,340nm吸光度的變化可計算還原型輔酶I氧化速率,還原型輔酶I氧化速率可反應(yīng)Rubisco的活性。
需自備的儀器和用品:
分光光度計/、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:25mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入100uL雙蒸水充分溶解待用;
試劑四:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入100uL雙蒸水充分溶解待用;
粗酶液制備:
稱取約0.1g組織加入1mL提取液,冰浴中勻漿。10000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
(1)工作液的配制:臨用前在試劑二中加入22.5mL試劑一,充分混勻,在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)孵育5min。
(2)在1mL石英比色皿中加入6uL樣本、7uL試劑三、7uL試劑四和180uL工作液,混勻,立即記錄340nm處20s時吸光值A1和2min20s時的吸光值A2,計算ΔA=A1-A2。
二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)檢測試劑盒
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