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描述:測(cè)定意義:淀粉酶負(fù)責(zé)水解淀粉,主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可隨機(jī)地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵,生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖。β-淀粉酶檢測(cè)試劑盒
標(biāo)題:β-淀粉酶檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品概述
β-淀粉酶檢測(cè)試劑盒
測(cè)定原理:
還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。α-淀粉酶不耐酸,β-淀粉酶不耐熱。根據(jù)上述特性,鈍化其中之一,就可測(cè)出另一種淀粉酶的活力。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、離心機(jī)、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:50mL×1瓶,常溫保存,若有黃色晶體析出,需加熱溶解后再用;
試劑二:40mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
稱(chēng)取約0.1g樣本,加入0.8mL蒸餾水,研磨勻漿;將勻漿倒入離心管中,提取液在室溫下放置提取15min,每5min振蕩1次,使其充分提取;3000g,常溫離心10min,取上清液加蒸餾水定容至10 mL,搖勻,即淀粉酶原液。
吸取上述淀粉酶原液1mL,加入4mL雙蒸水,搖勻,即為淀粉酶稀釋液,用于(α+β)淀粉酶總活力的測(cè)定。
測(cè)定步驟和操作表:
試劑名稱(chēng)(μL) | α?淀粉酶活力測(cè)定 | 總淀粉酶活力測(cè)定 | ||
對(duì)照管 | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |
淀粉酶原液 | 250 | 250 |
|
|
70℃水浴15min左右,冷卻
淀粉酶稀釋液 |
|
| 250 | 250 |
試劑一 | 500 |
| 500 |
|
將以上對(duì)照管、測(cè)定管和試劑二置于40℃恒溫水浴中保溫10min左右
試劑二 | 250 | 250 | 250 | 250 |
在40℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫5min
試劑一 |
| 500 |
| 500 |
混勻,室溫靜置10min,在540nm下測(cè)定吸光度,從左到右分別記為A1、A2、A3和A4。
β-淀粉酶檢測(cè)試劑盒
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