標(biāo)題：6-磷酸葡糖糖酸脫氫酶（6PGDH）檢測試劑盒

產(chǎn)品概述

6-磷酸葡糖糖酸脫氫酶(6PGDH)檢測試劑盒

自備儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL石英比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配置：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前配制，加入5 mL試劑一，混勻。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前配制，加入5 mL試劑一，混勻。

粗酶液提取：

稱約0.1g組織，加入1mL試劑一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃離心10min，取上清液，待測。

測定：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一置于25℃或者37℃水浴預(yù)熱30 min以上。

3. 空白管：取1mL石英比色皿，依次加入100μL蒸餾水，100μL試劑二，700μL試劑一，100μL試劑三，于340nm處測定3min內(nèi)吸光值變化，第0s吸光值記為A1，第180s吸光值記為A2。

4. 測定管：取1mL石英比色皿，依次加入100μL粗酶液，100μL試劑二，700μL試劑一，100μL試劑三，于340nm處測定3min內(nèi)吸光值變化，第10 s吸光值記為A3，第190s吸光值記為A4。

6PGDH活性計(jì)算：

活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH的酶量為1U（U/mg pr）。

6PGDH酶活性(U/mg prot)

= [(△A測定管-△A空白管)×V反總÷ε÷d×10⁹]÷(Cpr×V樣)÷T

= 535.9×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr

△A測定管：A4－A3；△A空白管：A2－A1；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6220；d：比色皿光徑，1 cm； V反總：反應(yīng)體系總體積，0.001 L；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒；V樣：反應(yīng)體系中加入粗酶液體積，0.1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，3 min。

注意事項(xiàng)：

（1）樣品處理等過程均需要在冰上進(jìn)行，且須在提取當(dāng)日完成酶活性測定，粗酶液避免反復(fù)凍融；

（2）試劑二和試劑三須現(xiàn)配現(xiàn)用，當(dāng)天未用完試劑保存在4℃，可保存1周。

6-磷酸葡糖糖酸脫氫酶(6PGDH)檢測試劑盒