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ATP含量檢測試劑盒使用手冊
ATP 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是生物能量通貨,能荷是描述細胞能量代謝狀態(tài)的主要
參數(shù)。測定ATP 含量并且計算能荷,能夠反映能量代謝狀態(tài)。
HK 催化葡萄糖和ATP 合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH,
NADPH 在340nm 有特征吸收峰,NADPH 和ATP 含量成正比,以此反應ATP 含量。
溶液的配制:
1.提取液低溫條件下,可能有結晶析出,放于60℃水浴加熱溶解即可,不影響使用。
2.試劑二:臨用前加入7 mL 蒸餾水充分溶解,可加熱促進溶解;
3.試劑四:臨用前取1 支加入0.2mL 蒸餾水溶解,用不完的試劑-20℃分裝保存2 周,避免反復凍融;
4.試劑五:臨用前加入3.2 mL 蒸餾水充分溶解,用不完的試劑-20℃分裝保存4 周,避免反復凍融;
5.試劑六:臨用前取1 支加入0.25 mL 蒸餾水備用,用不完的試劑-20℃分裝保存2 周,避免反復凍融;
6.標準品:5 mg ATP。臨用前加入0.826 mL 蒸餾水配成10 μmol/mL 的ATP 標準溶液,用不完的試劑-20℃
分裝保存4 周,避免反復凍融;
7.工作液的配制:臨用前請按試劑二(mL):試劑三(mL):試劑四(mL):試劑五(mL):試劑六(mL)=1:1:0.1:0.4:
0.1 的比例配制(2.6mL,約10T 的量),現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意事項:
1、加入提取液離心后的上清若為渾濁為正常現(xiàn)象。
2、如果吸光值大于1.1,建議將樣本用提取液稀釋后進行測定。注意計算公式中乘以稀釋倍數(shù);如果吸光值過低
或接近空白,建議加大樣本量后進行測定,注意同步修改計算公式。
實
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