直接抗人球蛋白試劑盒操作步驟

簡要描述：直接抗人球蛋白試劑盒現(xiàn)貨供應。用于抗球蛋白試驗（Coombs試驗）是測定結(jié)合在紅細胞上的抗體和/或補體的主要方法。直接Coombs試驗是檢測體內(nèi)已被抗體和/或補體致敏的紅細胞。間接Coombs試驗通過血清與細胞的孵育，證實抗體和/或補體與紅細胞在體外的結(jié)合。根據(jù)醫(yī)療器械體外診斷試劑注冊分類，本試劑暫時只用于直接抗球蛋白試驗。

[檢驗方法]

1.     標本的收集：見[樣本要求]

2.     直接抗球蛋白試驗：

2.1 將1滴受檢者3％紅細胞懸液加入干凈的小試管中（75×12mm），用鹽水洗滌3次[以3400轉(zhuǎn)/分(1000g)，離心1分鐘]。每次洗滌后，將上清液全部倒出。

2.2 加入2滴抗IgG, C3d (多特異性)或抗IgG或抗C3d，以3400轉(zhuǎn)/分(1000g)，離心15秒，用肉眼或借助光鏡觀察凝集，并按程度記錄結(jié)果。

2.3 判斷結(jié)果須持一定角度輕輕地搖動試管直到松動所有的細胞，然后反復傾斜試管，直到均勻的細胞懸液（陰性）或者凝集物（陽性）為止。

2.4 如陰性結(jié)果，在室溫中放置5-10分鐘，再離心一次，重讀結(jié)果。這樣做，陰性反應有時會變成陽性。

    注意：僅對C3d和IgA致敏紅細胞有增強作用，IgG致敏細胞反而會變?nèi)酰ㄒ娮⒁馐马棧?/span>

3.     陽性對照（IgG抗D致敏細胞）：

3.1 每批新的試劑，或在4℃保存時間過長，需做陽性對照試驗，至少每月一次。1滴陽性對照細胞加2滴直接抗人球蛋白試劑，離心判定結(jié)果。

3.2 在試驗中，于判為陰性的試管內(nèi)加入1滴陽性對照細胞，再離心，然后重懸浮，判定結(jié)果。如果zui初洗滌能充分除去所有未結(jié)合的球蛋白，結(jié)果為陽性。這是一個重要的對照，因為這是檢測細胞是否洗滌充分的*方法。

3.3 陽性對照細胞（IgG抗D致敏細胞）制備： 1份市售抗D（IgG）試劑（效價≥1:8）＋1份Rh（D）陽性O型紅細胞混勻，370C水浴30分鐘，用生理鹽水三洗，配成3％紅細胞懸液，當天使用。

[檢驗結(jié)果的解釋] 

陽性反應——出現(xiàn)紅細胞凝集。表示紅細胞上有相應抗體存在。

陰性反應——紅細胞不凝集。表示紅細胞沒有相應抗體存在。

[檢驗方法的局限性]某些文獻報告指出使用抗IgG測定抗體偶爾會失敗，可依靠含有抗C3成分的多價抗球蛋白試劑測定。沒有被IgG 測得的抗體在某些病例中可能有臨床意義?？笽gG可用在抗體篩選和相容性試驗中，但必須認識到它的局限性。