檢驗(yàn)大腸菌群和致病菌

一、大腸菌檢測(cè)：1加樣：將試劑盒放在試驗(yàn)臺(tái)面上，打開盒蓋，用滅菌吸管分別吸取3個(gè)原液或1:10樣品稀釋液1ml加到標(biāo)號(hào)為4、5、6的小培養(yǎng)基孔內(nèi)。

另用滅菌吸管分別吸取3個(gè)1:10或1:100的樣品稀釋液1ml加到標(biāo)號(hào)為7、8、9的小培養(yǎng)基孔內(nèi)，標(biāo)號(hào)為10的小培養(yǎng)基孔內(nèi)可加入1ml滅菌生理鹽水作為培養(yǎng)基陰性對(duì)照孔使用。2排氣泡：加樣后集氣窗內(nèi)如有氣泡存在，可將試劑盒以30～45度角傾斜使氣泡排出，必要時(shí)可輕輕用力在桌面上敲擊數(shù)下排出氣泡。3培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒蓋上蓋，平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24小時(shí)。5. 注意事項(xiàng)：1加入樣品后不需搖勻，平拿平放。2 加樣時(shí)可用一次性無(wú)菌塑料吸管，將樣品稀釋液加至試劑盒所標(biāo)刻度處。3 在培養(yǎng)箱中取試劑盒時(shí)應(yīng)平托出來(lái)，不要傾斜以免由于試劑盒的傾斜將陽(yáng)性管集氣窗中的氣泡排出而影響結(jié)果。4觀察結(jié)果：樣液變?yōu)辄S色為產(chǎn)酸、集氣窗中有氣泡為產(chǎn)氣，產(chǎn)酸產(chǎn)氣者為陽(yáng)性結(jié)果，陽(yáng)性結(jié)果的孔數(shù)越多，說(shuō)明污染越嚴(yán)重。

二.快速檢驗(yàn)方法原理：與國(guó)標(biāo)法相同。事先將濃縮乳糖膽鹽培養(yǎng)基、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液、GN增菌液、7.5%氯化鈉培養(yǎng)基、包被在試劑盒中，隨時(shí)取用。依據(jù)國(guó)標(biāo)GB/T4789.3.4.5.6.7.10.14-2003方法，采用包被技術(shù)將相對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基包被在試劑盒底部，隨時(shí)取用。省去了實(shí)驗(yàn)前的大量準(zhǔn)備工作，方便、快捷。

三、快速檢驗(yàn)操作方法：

（1）樣品處理：按《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)》GB/T4789.3.4.5.10-2003。2 加樣：將試劑盒放在臺(tái)面上，打開盒蓋，用無(wú)菌吸管吸取3個(gè)1：10稀釋液10mL分別加入試劑盒3個(gè)大發(fā)酵培養(yǎng)基孔內(nèi)，用無(wú)菌吸管吸取3個(gè)1mL分別加入試劑盒3小發(fā)酵培養(yǎng)基孔內(nèi)。另用無(wú)菌吸管取1：10稀釋后的樣品1mL注入到9mL滅菌生理鹽水中(1：100)取此管3個(gè)1mL稀釋液加入到試劑盒另3個(gè)小發(fā)酵培養(yǎng)基孔內(nèi)。另用無(wú)菌吸管吸取稀釋后的樣品3個(gè)4mL分別加入致病菌增菌管(孔)(A、B、C)孔內(nèi)。3 排氣泡: 加樣后集氣窗內(nèi)如有氣泡存在，可將試劑盒以30～45度角傾斜，(圖1)必要時(shí)可輕輕用力在桌面敲擊數(shù)下即可排出集氣窗內(nèi)氣泡。4 培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒置36℃± 1℃溫箱中，培養(yǎng)18～24h。

（2）致病菌檢測(cè)：1加樣：用滅菌吸管吸取原液或1:10樣品稀釋液4ml～10 ml(不得少于4ml)分別加入到標(biāo)號(hào)為1、2、3、A、B、C的增菌格(孔)內(nèi)。加樣后的1、2、3號(hào)分別為副溶血弧菌、致瀉大腸埃希菌、板奇腸桿菌增菌液;A、B、C分別為金黃色葡萄球菌、沙門菌、臘樣芽孢桿菌增菌液。2培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒蓋上蓋，平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)6～18小時(shí)。3 觀察結(jié)果：如果某致病菌的增菌液發(fā)生渾濁，即預(yù)示含有此種致病菌。可將渾濁液接種于各相對(duì)應(yīng)的選擇性培養(yǎng)基上或接種于相對(duì)應(yīng)的測(cè)試片上。置36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，18～24小時(shí)觀察驗(yàn)證結(jié)果。

四、快速測(cè)試適用范圍：適用于各類食品、純凈水等樣品中大腸菌群數(shù)檢測(cè)，致病菌(沙門菌、志賀菌、金黃色葡萄球菌)的快速篩查或進(jìn)一步檢測(cè)；致病性沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、副溶血弧菌、致瀉大腸埃希菌、臘樣芽孢桿菌、板奇腸桿菌檢測(cè)的前期增菌預(yù)實(shí)驗(yàn)觀察以及大腸菌群污染程度的檢測(cè)。