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DNS試劑(Ghose法)檢測原理
產(chǎn)品簡介:
Ghose法DNS試劑。又稱3,5-二硝基水楊酸法或簡稱DNS法,DNS試劑是植物總糖和還原糖檢測(硝基水楊酸法)的成分之一,定量檢測植物組織樣品中的總糖和還原糖的含量。
檢測原理是還原糖在堿性條件下被氧化成糖酸,3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物。在一定范圍內(nèi),還原糖的量與棕紅色產(chǎn)物的顏色深淺程度呈一定比例關(guān)系。在540nm處測定棕紅色物質(zhì)的吸光度,該吸光度值與還原糖含量呈線性關(guān)系。
【產(chǎn)品名稱】:DNS試劑(Ghose法)
【產(chǎn)品規(guī)格】:500ml
【儲(chǔ)存條件】:2-8℃
【有效期】:12個(gè)月
操作步驟(僅供參考):
1、 還原糖的提?。?/span>
①稱取植物樣品0.5~3g,剪碎,加入蒸餾水約3ml勻漿,轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中,用12ml蒸餾水沖洗研磨器2~3次,洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器②50℃水浴30min,并不時(shí)攪拌,以便還原糖徹底浸出
③將沉淀和浸出液轉(zhuǎn)移至50ml離心管,4000g離心5min。
④留取上清液,向沉淀中加入20ml蒸餾水,混勻,再次4000g離心5min。
⑤留取上清液,將2次獲得的上清液合并,用蒸餾水定容至100ml(提取液),混勻,作為還原糖待測液。
2、 總糖的水解和提取:
①稱取植物樣品0.5~3g,剪碎,加入蒸餾水約3ml勻漿,轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中,用12ml蒸餾水沖洗研磨器2~3次,洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。
②向容器中加入10ml 6M鹽酸溶液,攪拌均勻,煮沸30min,并不時(shí)攪拌。
③取2滴滴加于載玻片上,滴加1滴顯色液,檢查水解是否完全,如已經(jīng)水解完全則不顯示藍(lán)色。
④水解完畢后,冷卻至室溫,加入6M氫氧化鈉溶液,使溶液pH至7.4左右,用蒸餾水定容至100ml,混勻,4000g離心5min或過濾,獲得上清或?yàn)V液。
⑤取上清或?yàn)V液10ml,用蒸餾水定容至100ml,成稀釋10倍的總糖水解液(提取液),取1ml總糖水解液,測定其還原糖的含量。
注意事項(xiàng):
1、 該試劑避免反復(fù)凍融,以免失效或效率下降,盡量避光保存。
2、 稀釋鹽酸和氫氧化鈉溶液時(shí),應(yīng)小心操作,避免傷人。
3、 一般市售的濃鹽酸摩爾數(shù)約為11.6M,應(yīng)稀釋至6M后使用。
4、 待測樣本如不能及時(shí)測定,應(yīng)置于2~8℃保存,3天內(nèi)穩(wěn)定。
5、 如果樣品還原糖濃度過高,應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測,結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。6、 總糖計(jì)算公式在測定干擾雜質(zhì)很少、還原糖含量相對(duì)總糖含量很少時(shí)使用,×0.9是為了從測定出的總糖水解成單糖中,扣除水解時(shí)所消耗的水量。
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